[发明专利]一株小白链霉菌基因工程菌及其构建方法与应用有效
| 申请号： | 201510886138.0 | 申请日： | 2015-12-04 |
| 公开（公告）号： | CN105441373B | 公开（公告）日： | 2019-01-18 |
| 发明（设计）人： | 徐虹;曹长虹;冯小海;许召贤;许宗奇;徐铮;徐得磊 | 申请（专利权）人： | 南京工业大学 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12N15/76;C12P13/02;C12R1/465 |
| 代理公司： | 南京苏高专利商标事务所(普通合伙) 32204 | 代理人： | 肖明芳 |
| 地址： | 210009 *** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一株小白链 霉菌 基因工程 及其 构建 方法 应用 | ||
1.小白链霉菌基因工程菌在制备 ε-PL 中的应用，所述小白链霉菌基因工程菌是将铵转运蛋白基因在 Streptomyces albulus PD-1 中过量表达，所述的铵转运蛋白基因的核苷酸序列如 SEQ ID No :1 所示。
2.根据权利要求 1 所述应用，其特征在于，所述的 Streptomyces albulus PD-1 为CCTCC NO:M2011043。
3.根据权利要求 1 所述应用，其特征在于，所述小白链霉菌基因工程菌的构建方法如下：
(1)以S. albulus PD-1 的基因组 DNA 作为模板，以 SEQ ID No :2 和 SEQ ID No :3所示核苷酸序列为引物，PCR 扩增得到铵转运蛋白 amtB 的核苷酸序列，将该核苷酸序列与 pIB139 质粒连接，得到重组质粒 pIB139-amtB；
(2) 接合转移法将重组质粒 pIB139-amtB整合入白色链霉菌 S. albulus PD-1 染色体，获得所述的工程菌；
(3) 抗性培养基筛选阳性克隆：在含有硫酸安普霉素的培养基上生长出的菌落为阳性克隆，即得到小白链霉菌基因工程菌。
4.根据权利要求 1 所述的应用，其特征在于，发酵过程中，培养基中 C/N 比为 2~23：1。
5.根据权利要求 1 所述的应用，其特征在于，发酵温度为 28~32 ℃。
6.根据权利要求 1 所述的应用，其特征在于，发酵时间为 6~8 天。
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