[发明专利]一种键合型固定相手性色谱柱的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及手性色谱柱领域，具体涉及一种键合型固定相手性色谱柱的制备方法。

背景技术

多糖类手性固定相在用于手性对映体分离与制备方面显示了巨大的优势，具有广泛的应用前景。目前，商品化的多糖衍生物手性固定相多是采用物理涂覆的方法将多糖衍生物固着在硅胶的表面，因此存在着手性固定相流失的问题，同时也不耐受大部分较强的极性溶剂，给实际使用带来诸多限制。针对这些问题，后续出现了键合型的多糖类手性固定相，以克服上述的问题。

目前的键合型固定相手性色谱柱的制备方法为先制备键合型固定相，再将固定相装填至手性柱中，制备步骤繁多、时间长、操作复杂，如中国专利CN100387333C公开的制备方法。固定相的制备过程中，首先将键合有不饱和双键的多糖衍生化物涂覆至硅胶表面，涂覆过程中涂层厚度难以控制，硅胶上涂覆的多糖衍生化物涂层厚度不均匀，键合后的硅胶粒径和比表面积变化较大、不均匀，这种现象在小粒径硅胶填料中更加突出，由此得到的手性色谱柱固定相不均一，另外，多糖衍生化物涂层较厚的硅胶填料在装填时还容易产生变形或者脱落，以上这些现象严重影响了手性色谱柱的柱效及分离能力。

发明内容

为克服现有键合型固定相手性色谱柱在固定相制备、装填中存在的缺陷，本发明的目的是提供一种键合型固定相手性色谱柱的制备方法。

本发明提供的制备方法包括以下步骤：

S1：制备键合有不饱和双键的硅胶，并将所述硅胶装填至手性色谱柱中；

S2：制备键合有不饱和双键的多糖衍生化物；

S3：将所述多糖衍生化物以溶液形式注入步骤S1所得的手性色谱柱中使其吸附于所述硅胶的表面，再向所述手性色谱柱中注入引发剂溶液，使所述硅胶的不饱和双键与所述多糖衍生化物的不饱和双键进行聚合反应形成键合型固定相。

本发明所述的硅胶可以为现有的适用于手性色谱柱的任意类型硅胶，尤其为小粒径硅胶；优选地，本发明所述的硅胶可以为多孔球形硅胶，其孔径为10～200纳米，粒径为1.5～50微米。

本发明制备方法步骤S1中所述的键合有不饱和双键的硅胶可以为现有键合型固定相制备方法制备的带有不饱和双键的硅胶；优选地，可通过以下物质与硅胶反应制得：乙烯基三乙氧基硅烷、γ-甲基丙烯酰氧基丙基三甲氧基硅烷或γ-甲基丙烯酰氧基丙基三乙氧基硅烷。制备方法可以为将反应物置于甲苯等惰性溶剂中加热反应一定时间，反应完毕后洗涤并干燥所得产物。

本发明制备方法步骤S1中硅胶的装填方法可以为现有任意装填方法，如淤浆法等。

本发明制备方法步骤S2中所述的键合有不饱和双键的多糖衍生化物可以为现有键合型固定相制备方法制备的带有不饱和双键的多糖衍生化物；优选地，可由多糖和衍生化试剂、含不饱和双键试剂反应制得。制备方法可以为将反应物置于吡啶等惰性溶剂中加热反应一定时间，反应完毕后洗涤并干燥所得产物。

其中，本发明制备方法所述的多糖包括但不限于纤维素、淀粉、壳聚糖、木聚糖或葡萄糖。

其中，本发明制备方法所述衍生化试剂包括但不限于苯基异氰酸酯、3,5-二甲基苯基异氰酸酯、3,5-二氯苯基异氰酸酯或对甲基-苯基异氰酸酯。

其中，本发明制备方法所述含不饱和双键试剂述包括但不限于丙烯酰氯、甲基丙烯酰氯、乙基丙烯酰氯、3-苯基丙烯酰氯或3-乙氧基丙烯酰氯。

本发明制备方法步骤S3中所述的溶液形式的多糖衍生化物可以为多糖衍生化物与有机溶剂形成的任意浓度的溶液，其中的有机溶剂可以为不与固定相成分发生反应的任意有机溶剂；优选地，步骤S3中所述的多糖衍生化物可以以二甲基乙酰胺或二甲基甲酰胺溶液的形式注入色谱柱中，溶液浓度可以为1～1000mg/mL。

本发明制备方法步骤S3中所述的引发剂可以为烯烃聚合反应中使用的任意引发剂，优选使用偶氮二异丁腈或戊二醛。所述引发剂可与有机溶剂形成的任意浓度的溶液，其中的有机溶剂可以为不与固定相成分发生反应的任意有机溶剂；优选地，引发剂溶液可以为二甲基乙酰胺或二甲基甲酰胺溶液，溶液浓度可以为1～1000mg/mL。

本发明制备方法中，多糖衍生化物溶液和引发剂溶液可以以高压泵注入的方法注入手性色谱柱中。

本发明制备方法步骤S3的聚合反应反应温度可以为50～100℃。

本发明制备方法中，为使聚合反应更加彻底，可重复多次注入多糖衍生化物溶液和引发剂溶液进行多次聚合反应，每次聚合反应的时间可以为40～100分钟。

本发明提供的制备方法具有以下优点：

1、应用范围广