[发明专利]一种魔芋甘露聚糖肽的制备方法

权利要求书

1.一种魔芋甘露聚糖肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)发酵：向每100mL培养基中加入魔芋飞粉1～4g，采用耐热解蛋白芽孢杆菌和短小芽 孢杆菌共生发酵，发酵完成后，发酵液经离心后去除菌体，取上清液，向其中加入1～5倍于上 清液体积的纯化水，然后用三氯乙酸调节pH值至3.8～4.2，静置后去除沉淀，去除沉淀后得到 的上清液即为魔芋糖肽液；

2)硫酸铵分级沉淀：向魔芋糖肽液中加入硫酸铵晶体，使硫酸铵的饱和度达到20～80％， 然后静置、离心，离心得到的沉淀用pH＝7～9的Tris-Hcl缓冲液溶解，再经透析后得到可溶性 糖肽；

3)用DEAE-52纤维素柱层析和SephadexG-100凝胶柱层析依次对可溶性糖肽进行分离纯 化，得到魔芋甘露聚糖肽粗品；

4)将魔芋甘露聚糖肽粗品进行ConA-Sepharose4B亲和柱层析，即得到纯化的魔芋甘露聚 糖肽。

2.根据权利要求1所述的魔芋甘露聚糖肽的制备方法，其特征在于：所述步骤1)中的 发酵工艺为：培养基的pH值为7.0～11.0，耐热解蛋白芽孢杆菌与短小芽孢杆菌的菌种比例为 1:(1～3)，使用的菌液浓度为5×10⁷～5×10⁹个/mL，接种量为4～12％，发酵温度为25～38℃， 发酵时间为24～48h。

3.根据权利要求1所述的魔芋甘露聚糖肽的制备方法，其特征在于：所述步骤1)中的 培养基是向每100mL蒸馏水中加入蛋白胨1g、牛肉膏1.5g、NaNO₃0.08～0.39g、K₂HPO₄0.04～0.25g、KCl0.01～0.12g、MgSO₄·7H₂O0.01～0.12g和FeSO₄0.001～0.01g后得到的。

4.根据权利要求1-3中任意一项所述的魔芋甘露聚糖肽的制备方法，其特征在于：所述 步骤1)中的发酵液在4℃下以8000～12000r/min的转速离心10～30min后去除菌体。

5.根据权利要求1-3中任意一项所述的魔芋甘露聚糖肽的制备方法，其特征在于：所述 步骤2)中的静置是在-4℃下静置10～20min，离心是在4℃及8000～12000r/min的转速下离心 10～30min。

6.根据权利要求1-3中任意一项所述的魔芋甘露聚糖肽的制备方法，其特征在于：所述 步骤3)中的DEAE-52纤维素柱层析条件为：层析柱规格为(1～20)cm×(20～80)cm，上样 量为1～500mL，依次用蒸馏水、0.05～0.15mol/L的NaHCO₃溶液梯度洗脱，洗脱流速为 0.5～80mL/min，每管收集2～4min，检测波长为280nm和490nm，合并同时具有糖、肽吸收峰 的组分，浓缩、透析后备用。

7.根据权利要求1-3中任意一项所述的魔芋甘露聚糖肽的制备方法，其特征在于：所述 步骤3)中的SephadexG-100凝胶柱层析条件为：层析柱规格为(1～20)cm×(50～120)cm， 上样量为3～350mL，洗脱剂为蒸馏水，洗脱流速为0.5～180mL/min，每管收集3～6min，检测 波长为280nm和490nm，合并同时具有糖、肽吸收峰的组分，再经浓缩、透析、乙醇沉淀干 燥后得到魔芋甘露聚糖肽粗品。

8.根据权利要求1-3中任意一项所述的魔芋甘露聚糖肽的制备方法，其特征在于：所述 步骤4)中的ConA-Sepharose4B亲和柱层析条件为：层析柱规格为(1～20)cm×(20～40)cm， 上样量为2～180mL，用0.2～0.5mol/L的α-甲基-D-甘露糖苷溶液竞争洗脱，洗脱流速为 0.5～80mL/min，收集液经透析、浓缩、乙醇沉淀干燥后得到纯化的魔芋甘露聚糖肽。

9.根据权利要求1-3中任意一项所述的魔芋甘露聚糖肽的制备方法，其特征在于：制得 的魔芋甘露聚糖肽中所含的甘露糖和葡萄糖的质量比为1.7:(1～4)。