[发明专利]一种魔芋甘露聚糖肽的制备方法

说明书

技术领域

本发明属于微生物发酵和药用肽领域，涉及一种糖肽的制备方法，具体涉及一种魔芋甘露 聚糖肽的制备方法。

背景技术

甘露聚糖肽曾用名为多抗甲素，是我国首创的一种生物免疫增强剂。它是由不同链长的甘 露聚糖肽分子组合在一起形成的混合物，不存在小分子糖类和游离氨基酸，其主要结构为多肽 链与甘露聚糖连接。现代药理及临床研究表明：甘露聚糖肽具有明显的生物活性，它可以调节 机体免疫紊乱，显著增强自身免疫力。现较多用于治疗免疫功能低下或免疫障碍性疾病，如反 复感冒、反复呼吸道感染、白细胞减少和肿瘤的辅助治疗以减轻放、化疗的不良反应等，并取 得了较好的疗效，临床应用越来越广泛。

魔芋飞粉是在魔芋精粉加工过程中，飘落在周围的质量轻、颗粒小的细粉。魔芋飞粉中含 有丰富的营养成分，蛋白质含量23.8％，水溶性糖分(甘露糖和葡萄糖)8.95％，是含高蛋白、 低甘露聚糖的良好资源，但由于魔芋飞粉存在特殊的蛋腥味和臭味，目前主要用作动物饲料， 利用率低。

目前，国内制备甘露聚糖肽主要从菌株培养液中提取，来源较单一。例如，专利申请号为 03117579.1、名称为甘露聚糖肽及其制备工艺及用途的中国专利，是从α-溶血链球菌的发酵产 物中分离提取精制而成甘露聚糖肽。专利申请号为200710093102.2、名称为高纯度甘露聚糖肽 的制备方法的中国专利、以及专利申请号为200710093103.7、名称为甘露聚糖肽的制备方法的 中国专利，均以α-溶血链球菌H1S-33号为菌株，进行液体发酵制备甘露聚糖肽。目前并未见 到有以魔芋飞粉为原料制备甘露聚糖肽的方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种魔芋甘露聚糖肽的制备方法，该方法以魔芋飞粉为原料，通过 发酵得到甘露聚糖肽，该方法既能拓宽甘露聚糖肽的来源，又为魔芋飞粉的开发利用提供了一 条新途径。

为达到上述目的，本发明采用的技术方案为：

一种魔芋甘露聚糖肽的制备方法，包括以下步骤：

1)发酵：向每100mL培养基中加入魔芋飞粉1～4g，采用耐热解蛋白芽孢杆菌和短小芽 孢杆菌共生发酵，发酵完成后，发酵液经离心后去除菌体，取上清液，向其中加入1～5倍于上 清液体积的纯化水，然后用三氯乙酸调节pH值至3.8～4.2，静置后去除沉淀，去除沉淀后得到 的上清液即为魔芋糖肽液；

2)硫酸铵分级沉淀：向魔芋糖肽液中加入硫酸铵晶体，使硫酸铵的饱和度达到20～80％， 然后静置、离心，离心得到的沉淀用pH＝7～9的Tris-Hcl缓冲液溶解，再经透析后得到可溶性 糖肽；

3)用DEAE-52纤维素柱层析和SephadexG-100凝胶柱层析依次对可溶性糖肽进行分离纯 化，得到魔芋甘露聚糖肽粗品；

4)将魔芋甘露聚糖肽粗品进行ConA-Sepharose4B亲和柱层析，即得到纯化的魔芋甘露聚 糖肽。

所述步骤1)中的发酵工艺为：培养基的pH值为7.0～11.0，耐热解蛋白芽孢杆菌与短小 芽孢杆菌的菌种比例为1:(1～3)，使用的菌液浓度为5×10⁷～5×10⁹个/mL，接种量为4～12％(接 种量为单位体积的培养基中接入的菌液的体积分数)，发酵温度为25～38℃，发酵时间为 24～48h。

所述步骤1)中的培养基是向每100mL蒸馏水中加入蛋白胨1g、牛肉膏1.5g、NaNO₃0.08～0.39g、K₂HPO₄0.04～0.25g、KCl0.01～0.12g、MgSO₄·7H₂O0.01～0.12g和FeSO₄0.001～0.01g 后得到的。

所述步骤1)中的发酵液在4℃下以8000～12000r/min的转速离心10～30min后去除菌体。

所述步骤2)中的静置是在-4℃下静置10～20min，离心是在4℃及8000～12000r/min的转 速下离心10～30min。