[发明专利]一种NK细胞的诱导培养方法

说明书

本发明涉及生物技术领域，公开了一种NK细胞的诱导培养方法。本发明所述方法先制备细胞三维培养载体；然后从外周血分离出单个核细胞并接种到细胞三维培养载体中，同时补加IL‑2、IL‑15、IL‑21以及OKT‑3因子诱导培养，定期补液。本发明在NK细胞的诱导培养引入了细胞三维培养载体进行诱导培养，同时配合细胞因子的加入，由此解决了传统培养方法扩增的数量有限、表面抗原CD3‑/CD56+的表达水平较低、细胞杀伤活性不高的问题，满足临床上对于NK细胞的需求。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体的说是涉及一种NK细胞的诱导培养方法。

背景技术

自然杀伤细胞(natural killer cell，NK)是机体重要的免疫细胞，不仅与抗肿瘤、抗病毒感染和免疫调节有关，而且在某些情况下参与超敏反应和自身免疫性疾病的发生。

细胞治疗是继手术、放疗和化疗之后的有一种肿瘤治疗方法，它一般作为手术、放化疗的辅助手段，延长患者的寿命，清除体内手术后残余的癌细胞。细胞治疗主要包括NK细胞治疗、CTL细胞治疗、CIK细胞治疗以及LAK细胞治疗等。

NK细胞是机体重要的免疫细胞，不只消灭细菌和病毒感染，还能消灭癌细胞或肿瘤。因此NK细胞被广泛应用于肿瘤癌症的临床治疗。目前，NK细胞的体外扩增培养多为二维培养，即把NK细胞接种到培养瓶中，添加诸如X-VIVO 15免疫细胞培养基以及加入一些因子组合诱导NK细胞扩增培养。然而，临床上采用NK细胞治疗肿瘤时，需要NK细胞的量较高，而普通的NK细胞诱导培养方法扩增的数量有限，很难达到临床回输的要求；同时所诱导培养的NK细胞中表面抗原表达水平(CD3-、CD56+)比较低，细胞对癌细胞的毒性效果不高。因此，必需寻找用另一种能增强NK细胞的增殖活性，最好同时能增强NK细胞的杀伤能力的免疫细胞培养方法。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种NK细胞的诱导培养方法，使得所述方法能够显著提高NK细胞的数量。

本发明的另一个目的在于提供一种NK细胞的诱导培养方法，使得所述方法能够显著提高NK细胞表面抗原CD3-/CD56+的表达水平，增强NK细胞的杀伤能力。

为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种NK细胞的诱导培养方法，包括：

步骤1、制备细胞三维培养载体；

步骤2、从外周血分离出单个核细胞并接种到步骤1中的载体中，同时补加IL-2、IL-15、IL-21以及OKT-3因子诱导培养，定期补液。

本发明主要引入了细胞三维培养的技术思维来解决现有免疫细胞NK细胞的技术问题，三维培养是指将具有三维结构的载体与各种不同的种类的细胞在体外共同培养，使细胞能够在载体的三维立体空间结构中迁移、生长，构成三维的细胞载体复合物。

二维细胞培养由于细胞在体外改变的环境下增生逐渐丧失了原有的性状,往往和体内情况不相符；动物实验虽在体内进行，但体内多种因素制约以及体内和外界环境相互影响而不能观察到研究者最为关心的中间过程。因此，现有技术提出了三维细胞培养技术模拟体内的微环境，填补了单层细胞培养和动物实验的鸿沟，主要用于医学领域的理论研究，但是将其用于提高免疫细胞的增殖活性以及杀伤活性还未见报道。而本发明针对现有NK细胞培养方式的缺点，将细胞三维培养载体引入NK细胞的培养中，利用载体进行NK细胞的三维培养，同时配合适宜的细胞因子，由此促进NK细胞的增殖，以及提高其表面抗原CD3-/CD56+的表达水平，增强NK细胞的杀伤能力。

在本发明中，所述步骤1具体为：

用免疫细胞培养基稀释细胞三维培养载体材料，于细胞培养容器中孵育包被，获得细胞三维培养载体。所述细胞三维培养载体材料是该领域经常用到的具有三维结构的载体材料。