[发明专利]一种固相片段法合成卡贝缩宫素

权利要求书

1.一种卡贝缩宫素的固相片段制备方法，其包括以下步骤：

1）以固相合成树脂为载体，通过连接受保护的氨基酸，脱除氨基保护基，再连接受保护的氨基酸的方法依次连接氨基和侧链经过保护的脯氨酸（Pro）、半胱氨酸（Cys）、天冬酰胺（Asn）、谷氨酰胺（Gln）、异亮氨酸（Ile）、酪氨酸（Tyr），得到末端氨基经过保护的线性六肽片段树脂；

2）脱除末端氨基保护后，连接4-氯丁酸，得到全保护七肽片段树脂；

3）脱除半胱氨酸巯基保护基，得到裸露巯基的七肽片段树脂；

4）在碱性条件下，在缩合剂作用下，末端氯基团与半胱氨酸侧链巯基偶联成环，得到环七肽片段树脂；

5）裂解环七肽片段树脂，得到环七肽片段；

6）以固相合成树脂为载体，通过连接受保护的氨基酸，脱除氨基保护基，再连接受保护的氨基酸的方法依次连接氨基经过保护的甘氨酸（Gly）和亮氨酸（Leu），得到二肽树脂；

7）将步骤5）所得环七肽片段连接到二肽树脂上，得到卡贝缩宫素肽树脂；

8）裂解卡贝缩宫素肽树脂，得到卡贝缩宫素；

其中，步骤4）所用的碱为DBU。

2.根据权利要求1所述的卡贝缩宫素的固相片段制备方法，其中所述氨基和侧链经过保护的脯氨酸选自Fmoc-Pro-OH；所述氨基和侧链经过保护的半胱氨酸选自Fmoc-Cys(Mmt)-OH；所述氨基和侧链经过保护的天冬酰胺选自Fmoc-Asn(Trt)-OH；所述氨基和侧链经过保护的谷氨酰胺选自Fmoc-Gln(Trt)-OH；所述氨基和侧链经过保护的异亮氨酸选自Fmoc-Ile-OH；所述氨基和侧链经过保护的酪氨酸选自Fmoc-Tyr(Me)-OH；所述氨基经过保护的甘氨酸选自Fmoc-Gly-OH；所述氨基经过保护的亮氨酸选自Fmoc-Leu-OH。

3.根据权利要求1或２任一项所述的卡贝缩宫素的固相片段制备方法，步骤1）和/或步骤6）中所述的固相合成方法是Fmoc固相多肽合成方法，选用的偶联剂为DIPCDI+A或者DIPEA+A+B，其中A选自HOBt或HOAt，B选自PyBOP、PyAOP、HATU、HBTU、TBTU中的一种或多种。

4.根据权利要求3所述的卡贝缩宫素的固相片段制备方法，偶联剂中各成分的比例以摩尔比例计为DIPCDI:A=1.1~1.5:1.0~1.4，DIPEA:A:B=1.8~2.2:1.0~1.4:0.95~1.05。

5.根据权利要求4所述的卡贝缩宫素的固相片段制备方法，偶联剂中各成分的比例以摩尔比例计为DIPCDI:A=1.3:1.2，DIPEA:A:B=2.0:1.2:1.0。

6.根据权利要求1-2任一项所述的卡贝缩宫素的固相片段制备方法，步骤3）的脱除试剂为三氟乙酸和三异丙基硅烷的二氯甲烷溶液，三氟乙酸浓度为2~5%，三异丙基硅烷浓度为3~8%。

7.根据权利要求1-2任一项所述的卡贝缩宫素的固相片段制备方法，步骤1）所用的树脂为wang树脂、2-CTC树脂，步骤６）所用的树脂为Rink Amide树脂、Rink Amide-AM树脂，Rink Amide-MBHA树脂。

8.根据权利要求7所述的卡贝缩宫素的固相片段制备方法，步骤1）为wang树脂，步骤６）为Rink Amide树脂。

9.根据权利要求8所述的卡贝缩宫素的固相片段制备方法，步骤6）中所述树脂替代度为0.2-0.9mmol/g。

10.根据权利要求9所述的卡贝缩宫素的固相片段制备方法，步骤6）中所述树脂替代度为0.4~0.6 mmol/g。

11.根据权利要求1-2任一项所述的卡贝缩宫素的固相片段制备方法，步骤５）和/或步骤８）获得产物后，还包括纯化步骤，所述纯化步骤选自重结晶、反相高压液相方法。