[发明专利]一种固相片段法合成卡贝缩宫素

说明书

本发明涉及一种卡贝缩宫素的固相片段制备方法，其包括以下步骤：1)以固相合成树脂为载体依次连接氨基和侧链经过保护的脯氨酸、半胱氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、异亮氨酸、酪氨酸得到线性六肽片段树脂；2)脱除末端氨基保护后，连接4‑氯丁酸；3)脱除半胱氨酸巯基保护基；4)在碱性条件下，在缩合剂作用下，末端氯基团与半胱氨酸侧链巯基偶联成环，得到环七肽片段树脂；5)裂解环七肽片段树脂；6)以固相合成树脂为载体依次连接氨基经过保护的甘氨酸和亮氨酸；7)将步骤5)所得环七肽片段连接到二肽树脂上，得到卡贝缩宫素肽树脂；8)裂解得到卡贝缩宫素。本申请选择Pro‑Leu之间的位点，所得的卡贝缩宫素纯度高。

技术领域

本发明涉及一种环肽的制备方法，具体涉及卡贝缩宫素的固相合成方法。

背景技术

卡贝缩宫素(Carbetocin)是一种合成的具有激动剂性质的长效催产素九肽类似物。硬膜外或腰麻下剖腹产术后可以立即单剂量静脉给药，以预防子宫张力不足和产后出血。

卡贝缩宫素的临床和药理特性与天然产生的催产素类似。像催产素一样，卡贝缩宫素与子宫平滑肌的催产素受体结合，引起子宫的节律性收缩，在原有的收缩基础上，增加其频率和增加子宫张力。在非妊娠状态下，子宫的催产素受体含量很低，在妊娠期间增加，分娩时达高峰。因此卡贝缩宫素对非妊娠的子宫没有作用，但是对妊娠的子宫和刚生产的子宫具有有效的子宫收缩作用。

研究表明，当硬膜外或腰麻下剖腹产术后立即单剂量静脉给予卡贝缩宫素100ug，在预防子宫张力不足和减少产后出血方面，卡贝缩宫素明显优于安慰剂。在产后的早期给予卡贝缩宫素也可以促进子宫的复旧。

卡贝缩宫素具有以下结构：

用氨基酸缩写表示为：

卡贝缩宫素及其类似物的制备方法早期主要是液相合成工艺，操作复杂，不利于工业生产、应用价值不高；目前在国外卡贝缩宫素申报的专利合成方面的也不多，其中包括一家西班牙公司的ES2115543，是固液相结合的合成方法，主要方法是：用常规固相多肽合成，采用HOBt/DIC体系得到4-chlorobutyl-Tyr(OMe)-Ile-Gln-Asn-Cys(Trt)-Pro-Leu-Gly-PAL-Nle-pMBHA,然后用TFA/1-Dodecanethiol/H₂O＝8:1:1裂解2小时(注：1-Dodecanethiol十二硫醇)，得到线形肽4-chlorobutyl-Tyr(OMe)-Ile-Gln-Asn-Cys-Pro-Leu-Gly－NH2，线性肽用1：1的乙腈和水作溶剂，用1M NaOH调pH＝9，环化得到卡贝缩宫素。其所用的碱还包括LiOH，NaHCO₃，DIEA，DMAP。

捷克专利CS：8605461，先用固相多肽合成方法合成肽树脂再裂解得到Z-Ile-Gln-Asn-Cys(Bzl)-Pro-Leu-Gly-NH₂，再氢化得到Ile-Gln-Asn-Cys-Pro-Leu-Gly-NH₂再跟4-Bromobutyric acid反应，得到Ile-Gln-Asn-Cys(C3H6COOH)-Pro-Leu-Gly-NH2再跟X-Tyr(OMe)-OH反应，脱保护，环化得到卡贝缩宫素。

在这些专利描述的方法中，都以液相方法进行环合，国内专利用液相环合的还有杭州和锦的专利(申请号：201010560715.4)，上海苏豪逸明制药的专利(申请号：201110001400.0)以及苏州天马的专利(申请号201510001735.0)，这种方法需要反应原料在极稀溶液中反应，且副反应较多，在规模化生产中需大量溶剂，随即产生大量废液。本发明利用固相假稀释原理，开发了固相高效环合方法，反应时间缩短至2～3小时，反应废液降为液相反应的1/10以下。并且能有效减少副反应，提高粗肽纯度，进而提高收率。