[发明专利]一种检测肉鸡粪便中洛克沙胂及其降解产物的方法

说明书

技术领域

本发明涉及化学分析检测领域，具体涉及一种动物排泄物中有机砷的形态分析检测方法。

背景技术

洛克沙胂(3-硝基-4-羟基苯砷酸，Roxarsone)是一种有机砷(As)化合物，因其具有抗菌和促生长效果，可作为添加剂在肉鸡饲料中使用。洛克沙胂在动物体内很少被降解，多是以原药的形式随粪便排出，进入环境产生严重的局部砷污染。在生态环境日趋恶化的今天，人们对有机砷制剂在环境中的降解、迁移以及对环境生物造成的影响越来越关注，洛克沙胂主要通过畜禽粪便进入环境，进入环境后，可能通过生物的或非生物的降解反应转变为迁移能力更强、毒性更大的含砷化合物，但迄今人们对这一过程还不甚了解。为了研究洛克沙胂随畜禽粪便排出后的迁移转化规律，评估洛克沙胂在环境中的残留状况与生态毒理学，急需建立一种快速准确的方法对洛克沙胂及其降解产物予以分析。

有机砷及其降解产物均属极性化合物，其在复杂环境样品中的分析方法首选是高压液相色谱(HPLC)法，将HPLC的分离优势与串联质谱(MS/MS)的鉴别特异性结合，必能进一步提高检测的准确度与灵敏度。迄今已有部分利用HPLC-MS/MS检测有机砷化物的文献报道，但研究目标多为检测土壤和食品基质中的有机砷残留及其降解产物，而利用HPLC-MS/MS检测畜禽排泄物中洛克沙胂转化产物的研究相对较少。因粪便成分复杂，样品基质极大地影响待测化合物在质谱中的离子化，所以必须对样品进行必要的提取净化前处理，以减少基质干扰。

然而，前人的研究多着眼于总砷含量及无机砷形态的分析，如现有的关于砷测定的标准包括：土壤总砷测定的行业标准NY/T1121.11-2006；水质砷测定的行业标准SL327.1-2005；食品添加剂中总砷测定的国家标准GB/T5009.76-2003；稻米中总砷测定的行业标准NY/T1099-2006；饲料中总砷测定的国家标准GB/T13079-2006；以及食品中总砷及无机砷测定的国家标准GB/T5009.11-2003，此外，与砷测定有关的专利包括：水产品中无机砷的测定方法(授权公告号：CN101261258B)等，上述方法均不涉及有机砷形态的分析测定。由于检测方法的不完善，导致洛克沙胂通过粪便进入环境后的降解途径尚不清楚。因此，寻求一种有效检测牲畜粪便中洛克沙胂及其有机降解产物也是目前研究环境中有机砷及其降解产物的首要任务。

发明内容

本发明的一个目的是针对上述技术缺陷提供一种检测肉鸡粪便中洛克沙胂及其降解产物的方法。

为实现上述目的，本发明首先提供了一种检测肉鸡粪便中洛克沙胂及其降解产物的方法，包括如下步骤：

1)使用甲醇/水作为提取液对粪便样品进行提取；

2)采用固相萃取柱进一步浓缩净化样品；

3)使用高效液相色谱—离子阱—飞行时间质谱联用仪进行分析。

进一步地，上述步骤可优化为：

1)将粪便样品进行冷冻干燥，在冷冻干燥的样品中加入体积比为1:9的甲醇/水溶液进行超声提取，将提取液进行离心；

2)将固相萃取柱进行固定，活化萃取柱，加入步骤1)中获得的上清液，再用淋洗液进行冲洗小柱，淋洗后再用洗脱液进行洗脱，将洗脱液进行过滤；

3)使用高效液相色谱—离子阱—飞行时间质谱联用仪进行分析。

本发明的一个优选方面，步骤1)中粪便样品与甲醇/水溶液的质量体积比是1:20～60g/ml；

超声提取的条件是：室温下超声提取30～50min；

离心的速率是：10000-15000转/分钟。

更近一步地，步骤1)可优化为：将粪便样品进行冷冻干燥，按照样品与甲醇/水溶液的质量体积比1:20～60g/ml在冷冻干燥的样品中加入体积比为1:9的甲醇/水溶液，在室温下进行超声提取30～50min，提取液以10000-15000转/分钟速率离心。

本发明的另一个优选方面，上述步骤2)中用1mL甲醇和1mL超纯水活化萃取柱；

加入上清液的量为1ml；

冲洗小柱的淋洗液的量为1ml；

洗脱小柱的洗脱液的量为1ml；

洗脱的速度为1.0mL/min；

过滤的条件为：0.45微米微孔滤膜过滤。

其中，上述的淋洗液为体积比为95:5的0.05mol/L乙酸钠/甲醇，pH为7；洗脱液为体积比为5:65～75:20～30的甲酸/甲醇/水，pH为2。