[发明专利]铜皮石斛的组织培养方法

权利要求书

1.一种铜皮石斛的组织培养方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤一、取铜皮石斛的果荚进行消毒和预处理，用体积分数为2％的洗洁精水溶液浸泡5min后，用流水冲洗15～30min，然后将铜皮石斛的果荚灼烧2次，每次灼烧5～10s后，得到外植体；

步骤二、将所述外植体切开，取出种子后接种到第一培养基中，在所述第一培养基中培养50～70天后得到无菌试管苗；

所述第一培养基中包括：MS、0.5mg/L赤霉素和2.0g/L活性炭；

步骤三、将所述无菌试管苗置于第二培养基中，在所述第二培养基中培养50～70天后得到试管苗丛生芽；

所述第二培养基中包括：MS、0.5～2.0mg/L的甲巯达嗪、0.2～1.5mg/L的2，4-二氯苯氧乙酸和0.2～0.5mg/L的激动素；

步骤四、将所述试管苗丛生芽置于壮苗培养基中，在所述壮苗培养基中培养20～40天后得到试管苗；

所述壮苗培养基中包括：花宝2号培养基、1.0～4.0mg/L的6-苄氨基腺嘌呤和1.0～4.0mg/L的萘乙酸；

步骤五、将所述试管苗置于生根培养基中，在所述生根培养基中培养30～50天后得到组培苗；

所述生根培养基中包括：1/2MS和20g/L的香蕉泥，所述香蕉泥为将香蕉搅碎后得到。

2.如权利要求1所述的铜皮石斛的组织培养方法，其特征在于，步骤一中将铜皮石斛的果荚灼烧2次的具体方法为：在无菌超净台内将铜皮石斛的果荚用无菌镊夹住，在整个果荚表面沾染体积分数为75％的酒精，然后灼烧，将酒精烧尽后再重复灼烧1次。

3.如权利要求2所述的铜皮石斛的组织培养方法，其特征在于，所述第一培养基、所述第二培养基、所述壮苗培养基以及所述生根培养基中均含有5g/L的琼脂和30g/L蔗糖，且所述第一培养基、所述第二培养基、所述壮苗培养基以及所述生根培养基的初始pH值均调节为5.8。

4.如权利要求2所述的铜皮石斛的组织培养方法，其特征在于，步骤二到步骤五中的培养均为控制光照培养，均为：培养温度23～27℃，光照强度1500lux，光照时间为8～10h/d。

5.如权利要求2所述的铜皮石斛的组织培养方法，其特征在于，还包括：

步骤六、炼苗，炼苗的具体方法为：将所述组培苗和培养所述组培苗的培养瓶一起移出培养室，打开培养瓶瓶盖，向培养瓶中加入30ml的自来水后，自然光照3～5d。

6.如权利要求5所述的铜皮石斛的组织培养方法，其特征在于，还包括：

步骤七、炼苗结束后，从培养瓶中取出所述组培苗，将所述组培苗的根部洗净后移栽至基质中，所述基质中树皮、腐殖质土与蛭石的体积比为1∶1∶1。

7.如权利要求4所述的铜皮石斛的组织培养方法，其特征在于，步骤四中控制光照培养以外，培养期间，每天早上6～7点，用红蓝LED光照射所述试管苗丛生芽0.2～0.5h，步骤五中控制光照培养以外，培养期间，每天早上6～7点和每天晚上7～8点各用红蓝LED光照射1次所述试管苗，每次0.5～1h。

8.如权利要求1所述的铜皮石斛的组织培养方法，其特征在于，所述第一培养基中含有5g/L果荚碎；

所述果荚碎的制备方法为：收集取出种子后的铜皮石斛的果荚，刮去灼烧痕迹后，用丙酮浸泡10～20min后，用无菌水冲洗，粉碎后，与燕麦片均匀混合得到混合物，将所述混合物在所述灭菌液中浸泡5～10min后，用无菌水冲洗，得到所述果荚碎，其中，所述燕麦片与铜皮石斛的果荚的质量比为1∶3。