[发明专利]铜皮石斛的组织培养方法

说明书

技术领域

本发明涉及栽培方法，更具体地说，本发明涉及一种铜皮石斛的组织培养方法。

背景技术

铜皮石斛，又名：细茎石斛，细黄草，属兰科石斛属，多年生附生草本，是一种名贵的中草药，具有极高的药用保健价值。近年来石斛的研究引起人们的广泛兴趣，铜皮石斛中含有较高的多糖、总生物碱等多种化学成份，现代药理研究更证明铜皮石斛具有益胃生津、滋阴清热、养清音明目、抗肿瘤、抗衰老、抗辐射、增强机体免疫能力等功效，因此铜皮石斛逐渐引起人们的关注。

然而由于兰科种子自然繁殖主要靠分株繁殖，在野外本就很难发芽，而随着社会的发展，人们过度的采摘使得野生的铜皮石斛资源大多遭到破坏，几近灭绝，因此寻找一种组织培养的方法培养铜皮石斛使铜皮石斛快速繁殖，实现铜皮石斛优质种苗的工厂化育苗，满足人们的需求，成为亟待人们解决的问题。

发明内容

本发明的一个目的是解决至少上述问题，并提供至少后面将说明的优点。

本发明还有一个目的是提供一种铜皮石斛的组织培养方法，能保持原有品种的优良性状，在短时间内培育出大量适合栽培种植的铜皮石斛幼苗，单芽增殖系数达20～30倍以上，且试管苗丛生芽健壮，在生根培养基中容易生根，移栽基质后成活率在90％以上。

为了实现根据本发明的这些目的和其它优点，提供了一种铜皮石斛的组织培养方法，包括以下步骤：

步骤一、取铜皮石斛的果荚进行消毒和预处理，用体积分数为2％的洗洁精水溶液浸泡5min后，用流水冲洗15～30min，然后将铜皮石斛的果荚灼烧2次，每次灼烧5～10s后，得到外植体；

步骤二、将所述外植体切开，取出种子后接种到第一培养基中，在所述第一培养基中培养50～70天后得到无菌试管苗；

所述第一培养基中包括：MS、0.5mg/L赤霉素和2.0g/L活性炭；

步骤三、将所述无菌试管苗置于第二培养基中，在所述第二培养基中培养50～70天后得到试管苗丛生芽；

所述第二培养基中包括：MS、0.5～2.0mg/L的甲巯达嗪、0.2～1.5mg/L的2，4-二氯苯氧乙酸和0.2～0.5mg/L的激动素；

步骤四、将所述试管苗丛生芽置于壮苗培养基中，在所述壮苗培养基中培养20～40天后得到试管苗；

所述壮苗培养基中包括：花宝2号培养基、1.0～4.0mg/L的6-苄氨基腺嘌呤和1.0～4.0mg/L的萘乙酸；

步骤五、将所述试管苗置于生根培养基中，在所述生根培养基中培养30～50天后得到组培苗；

所述生根培养基中包括：1/2MS和20g/L的香蕉泥，所述香蕉泥为将香蕉搅碎后得到。

优选的是，将铜皮石斛的果荚灼烧2次的具体方法为：在无菌超净台内将铜皮石斛的果荚用无菌镊夹住，在整个果荚表面沾染体积分数为75％的酒精，然后灼烧，将酒精烧尽后再重复灼烧1次。

优选的是，所述第一培养基、所述第二培养基、所述壮苗培养基以及所述生根培养基中均含有5g/L的琼脂和30g/L蔗糖，且所述第一培养基、所述第二培养基、所述壮苗培养基以及所述生根培养基的初始pH值均调节为5.8。

优选的是，步骤二到步骤五中的培养均为控制光照培养，均为：培养温度23～27℃，光照强度1500lux，光照时间为8～10h/d。

优选的是，还包括：

步骤六、炼苗，炼苗的具体方法为：将所述组培苗和培养所述组培苗的培养瓶一起移出培养室，打开培养瓶瓶盖，向培养瓶中加入30ml的自来水后，自然光照3～5d。

优选的是，还包括：

步骤七、炼苗结束后，从培养瓶中取出所述组培苗，将所述组培苗的根部洗净后移栽至基质中，所述基质中树皮、腐殖质土与蛭石的体积比为1∶1∶1。

优选的是，步骤四中控制光照培养以外，培养期间，每天早上6～7点，用红蓝LED光照射所述试管苗丛生芽0.2～0.5h，步骤五中控制光照培养以外，培养期间，每天早上6～7点和每天晚上7～8点各用红蓝LED光照射1次所述试管苗，每次0.5～1h。

优选的是，所述第一培养基中含有5g/L果荚碎；

所述果荚碎的制备方法为：收集取出种子后的铜皮石斛的果荚，刮去灼烧痕迹后，用丙酮浸泡10～20min后，用无菌水冲洗，粉碎后，与燕麦片均匀混合得到混合物，将所述混合物在所述灭菌液中浸泡5～10min后，用无菌水冲洗，得到所述果荚碎，其中，所述燕麦片与铜皮石斛的果荚的质量比为1∶3。

本发明至少包括以下有益效果：