[发明专利]一种快速检测海洋双壳类生物体内类胡萝卜素含量的方法

说明书

技术领域

本发明属于类胡萝卜素含量检测技术领域，具体涉及一种快速检测海洋双壳 类生物体内类胡萝卜素含量的方法。

背景技术

类胡萝卜素(Carotenoids，CAR)作为一种多烯类物质因其含有多不饱和双 键而具有一定的抗氧化能力，同时还具有其他多种生物学功能。有研究表明贝类 体内的类胡萝卜素含量与贝类的生长生活以及性腺发育均表现出一定的关联性。 如对虾夷扇贝(Patinopectenyessoensis)的研究表明在性腺发育时期闭壳肌类胡萝 卜素的含量达到最高值，生殖期过后类胡萝卜素的含量随之降低；同时富含类胡 萝卜素的个体在苗期、分笼养殖过程及产卵后的成活率均高于对照组，具有显著 较高的抗逆性；而对华贵栉孔扇贝(ChlamysnobilisReeve)的研究则发现富含 类胡萝卜素的个体具有较高的总抗氧化能力，以及类胡萝卜素含量与该物种性 别、壳色和组织间存在显著相关性。此外还有研究发现三角帆蚌(Hyriopsis cumingii)体内的类胡萝卜素含量与其珍珠层的色泽之间存在一定的关联，因此类 胡萝卜素含量同样也关乎珍珠贝的育珠质量。综上，鉴于类胡萝卜素对双壳类生 物多种生长及生理活动的影响，深入探讨CAR在双壳类生物群体内的含量水平 和分布状况是非常必要的。

类胡萝卜素作为一种广受关注的天然色素广泛存在于各类软体动物中，如各 类扇贝、珍珠贝、乌贼、螺等，其组织分布包括软体部及壳等部位。然而，迄今 为止，对这些物种体内的CAR含量的大批量、群体水平的快速检测方法鲜有研 究。现有的测定方法是采用干燥、提取和分光光度检测的流程和方法来进行的， 而这种常规的方法却存在着若干缺点，比如：1、耗时长。样品的冷冻干燥处理 一般需要2～3天才能完成且每次处理的样品数量有限，样品的研磨、称量、提取 和检测同样费工费时，工作强度较大；2、用样量多。出于保证精确度的考虑， 每次需要用的干燥样品量为0.1～0.2g，较大地消耗了实验样品；3、涉及挥发性 药品。样品在提取过程中需要用到丙酮，该药品在室温下易挥发，且属于易燃物 品，故对实验室环境及安全存在一定影响；4、实用性弱。每次只能够测定少量 样品，不能够批量测定，实用性弱。这种常规测定总类胡萝卜素含量(Total carotenoidscontents，TCC)的方法已远远不能适用于大批量、多批次的双壳贝类 科学研究的需要，因此，必须建立一种快速、高效并且可靠的测定TCC的方法。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种快速检测海洋双壳类生物体内类胡 萝卜素含量的方法，该方法重复性好、实用性强、快速高效，并且除了建立回归 曲线需要少量样品之外不再消耗样品。

本发明方法通过使用色差仪对部分海洋双壳类生物体闭壳肌组织切片进行 色差检测，获取相对红度参数(Δa)，然后将其与TCC相关联并建立Δa-TCC的 线性回归方程，从而实现由相关的色差参数对个体类胡萝卜素含量的评估。

由于色差指标在检测过程中可直接施用新鲜组织样品，无需对样品进行干 燥、研磨和萃取等操作，因此具有快速、高效的优势，尤其是面对大量待测样品 时次优势尤为明显，实用性极强。并且，在后续检测过程中基本没有样品消耗， 检测后的样品可继续用于其他多种生理生化指标的检测，因此极大提高了单个样 品的利用率。此外，检测过程中避免了传统的TCC检测所需要的有机溶剂和多 种大型设备，因此又具有安全、简便的特点。

本发明所要解决的上述技术问题是通过以下技术方案来实现的：一种快速检 测海洋双壳类生物体内类胡萝卜素含量的方法，包括以下步骤：

(1)组织取样和预处理：选取海洋双壳类生物体闭壳肌样品若干，取样并 充分冷冻后横向切片处理，获得组织切片；

(2)组织切片色差检测：将组织切片采用色差仪进行检测，色差检测结果 即相对红度Δa；

(3)总类胡萝卜素含量TCC检测：采用传统方法检测步骤(2)中进行过 色差检测的组织切片的总类胡萝卜素含量TCC；

(4)建立相对红度Δa-TCC回归曲线：将步骤(2)中检测的组织切片的相 对红度Δa与步骤(3)中检测的组织切片的总类胡萝卜素含量TCC建立线性回 归方程；