[发明专利]ω-转氨酶突变体及其编码基因和制备方法

权利要求书

1.ω-转氨酶突变体，其特征在于，氨基酸序列如SEQ ID NO.2或SEQ ID NO.4或SEQ IDNO.6或SEQ ID NO.8或SEQ ID NO.10所示。

2.编码权利要求1所述ω-转氨酶突变体的基因。

3.如权利要求2所述的基因，其特征在于，核苷酸序列如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.3或SEQ ID NO.5或SEQ ID NO.7或SEQ ID NO.9所示。

4.一种包含权利要求2或3所述基因的表达盒。

5.如权利要求4所述的表达盒，其特征在于，启动子为T7启动子、lac启动子或araBAD启动子。

6.一种包含权利要求4所述表达盒的重组质粒。

7.一种包含权利要求6所述重组质粒的转化子。

8.如权利要求7所述的转化子，其特征在于，宿主细胞为大肠杆菌细胞。

9.一种生物酶突变体的制备方法，包括以下步骤：

(1)获得野生型酶中各个氨基酸残基的B-factor值，确定需要突变的氨基酸残基；

(2)计算酶突变前后的折叠自由能之差，预测可行的突变；

(3)根据预测结果，设计定点突变引物，以野生型酶基因为模板，进行定点PCR扩增，转化至宿主细胞，获得定点突变文库；

(4)从定点突变文库中筛选获得热稳定性提高的酶突变体；

所述野生型酶为分离自土曲霉(Aspergillus terreus)的ω-转氨酶；

得到的热稳定性提高的酶突变体对应的定点突变引物为：

T130F-F：5’-TAAAGGGGTGCGAGGATTTCGTCCGGAAGATATAG-3’；

T130F-R：5’-TATATCTTCCGGACGAAATCCTCGCACCCCTTTAA-3’；

或

T130M-F：5’-AAGGGGTGCGAGGAATGCGTCCGGAAGATATAG-3’；

T130M-R：5’-TATATCTTCCGGACGCATTCCTCGCACCCCTTT-3’；

或

T130A-F：5’-AAAGGGGTGCGAGGAGCGCGTCCGGAAGATATAG-3’；

T130A-R：5’-TATATCTTCCGGACGCGCTCCTCGCACCCCTTTA-3’；

或

E133F-F：TGCGAGGAACTCGTCCGTTTGATATAGTGAACAACCTG；

E133F-R：AGGTTGTTCACTATATCAAACGGACGAGTTCCTCGCAC；

或

E133Q-F：TGCGAGGAACTCGTCCGCAGGATATAGTGAACAACCTG；

E133Q-R：AGGTTGTTCACTATATCCTGCGGACGAGTTCCTCGCAC。