[发明专利]一种丙酮酸生产强度提高的重组菌及其应用有效
申请号: | 201510907232.X | 申请日: | 2015-12-10 |
公开(公告)号: | CN105368884B | 公开(公告)日: | 2019-01-04 |
发明(设计)人: | 周景文;陈坚;罗正山;堵国成;刘松;方芳 | 申请(专利权)人: | 江南大学 |
主分类号: | C12N1/19 | 分类号: | C12N1/19;C12N1/16;C12P7/40;C12R1/72 |
代理公司: | 哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司 23211 | 代理人: | 耿晓岳 |
地址: | 214122 江*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 丙酮酸 生产 强度 提高 重组 及其 应用 | ||
1.一种产丙酮酸重组菌,其特征在于,所述重组菌过表达线粒体丙酮酸载体蛋白MPC1基因,所述MPC1基因连接有序列为SEQ ID NO.1的信号肽;所述重组菌是以缺失了Ura基因的光滑球拟酵母Torulopsis glabrata CCTCC M202019为宿主,表达连接有信号肽的NCBI上Gene ID:852800的MPC1。
2.根据权利要求1所述的重组菌,其特征在于,所述过表达是以酵母表达质粒pY26为载体。
3.根据权利要求1所述的重组菌,其特征在于,所述重组菌的构建:(1)将目的片段MPC1经过限制性内切酶EcoR I和Xam I双酶切消化后,并将MPC1定向克隆到表达质粒pY26中,得到重组酵母表达质粒pY26-MPC1;(2)将序列为SEQ ID NO.1的信号肽Shrew1p用BamH I和Xma I双酶切消化后连接到被BamH I和Xma I双酶切消化的pY26-MPC1上,得到重组质粒pY26-Shrew1p-MPC1;(3)重组质粒pY26-Shrew1p-MPC1电转化尿嘧啶营养缺陷型受体菌,在不含尿嘧啶的培养基中进行筛选,得到重组菌TgU--pY26-Shrew1p-MPC1。
4.一种提高丙酮酸产量和生产强度的方法,其特征在于,所述方法是使用权利要求1-3任一所述重组菌。
5.权利要求1-3任一所述重组菌在发酵生产丙酮酸方面的应用。
6.根据权利要求5所述的应用,其特征在于,所述应用是将重组菌活化后接种至发酵培养基,在30℃,220rpm条件下进行发酵培养。
7.根据权利要求6所述的应用,其特征在于,所述发酵培养基1L中含有:葡萄糖120g,尿素3.86g,MgSO4.7H2O 0.8g,KH2PO4 2g,CH3COONa 3g,微量元素液10ml,维生素液10ml,初始pH=5.5;所述微量元素液:MnCl2·4H2O 12g,FeSO4·7H2O 2g,CaCl2·2H2O 2g,CuSO4·5H2O0.05g,ZnCl2 0.5g,用2mol/L的HCl溶解后定容至1L;所述维生素液:生物素0.004g,硫胺素0.75mg,吡哆醇0.04g,烟酸0.8g,用2mol/L的HCl溶解后定容至1L。
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