[发明专利]一种应用于核酸扩增体系的冻干保护剂

说明书

技术领域

本发明涉及分子生物学技术领域，特别是涉及一种应用于核酸扩增体系的冻干保护剂。

背景技术

聚合酶链反应(PCR)技术基于其快速、简便、灵敏、特异等优点，自1989年开始就被应用于医学检测和临床检验，随后很快地成为医学和诊断学的主要检测手段之一。

DNA核酸扩增，是一种分子生物学技术，用于放大扩增特定的DNA片段。利用DNA在体外高温时变性会变成单链，低温时引物与单链按碱基互补配对的原则结合，再调温度至DNA聚合酶最适反应温度，DNA聚合酶沿着磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互补链。PCR的特点是：特异性强、灵敏度高、简便快速、纯度要求低，广泛用于各种疾病和肿瘤等的检测。

RNA核酸扩增，是将RNA的逆转录体系和DNA扩增体系相结合的技术。能够实现一步对RNA进行检测，不但操作方便，灵敏度也得到了很大的提升，使一些极为微量RNA样品分析成为可能。RT-PCR技术灵敏而且用途广泛，已广泛用于涉及到核酸的科学研究以及临床疾病的诊断和治疗监测。

核酸分子诊断成为了诊断试剂行业的发展方向，荧光定量核酸诊断试剂是目前市场上最先进的诊断试剂。常规检测的乙肝、丙肝、艾滋、也可用于医院、疾控等临床样本中对各种各样的细菌、病毒感染等疾病的检测。而且相对于传统的培养、镜检、免疫学方法等来说，核酸诊断具有其他方法无法替代的灵敏和及时等优点。

核酸诊断被广泛应用于各种病原体的检测上，但是核酸扩增反应试剂在常温下保存不稳定，几周就失效了；在2～8℃条件下保存，保存期也只有三个月左右；-20℃条件下的保存期虽然可以达到一年之久，但是每次使用必须要反复冻融，这对试剂的活性也有很大的影响，并且各组分不能混合一起，用时需混合，操作麻烦等缺点，试剂盒的长期保存和长途运输将会受到很大的限制，容易因诊断试剂保存温度不当而使其敏感性下降甚至完全失效，最终导致疫病的检测不及时而造成疫病流行。

目前，市场上核酸扩增反应试剂缺少能在4℃或室温长期保存的方法，这也限制了核酸诊断试剂产品的市场。。

核酸技术作为一种新生的高新技术，代表临床实验诊断学发展的又一里程碑，十多年的临床实践表明，荧光定量核酸诊断技术已在医学基础检测和临床诊断中占据主导地位，因此开发适用于荧光定量核酸试剂常温保存的相关技术已迫在眉睫。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于：提供了一种应用于核酸扩增体系的冻干保护剂。本发明冻干保护剂为应用于荧光定量核酸诊断试剂的冻干技术提供了一种有效的、可以实现的冻干体系。诊断试剂通过冷冻干燥的技术，液体试剂变成冻干粉，以冻干粉的形式能更稳定的保存，达到现阶段核酸诊断试剂无法达到的常温运输和常温保存的目的，也减少了试剂反复冻融。检测时只需一步水化再加入样本即可以实现检测目的，操作简单。

为解决上述技术问题，本发明提供了一种应用于核酸扩增体系的冻干保护剂，包括以下组份中的一种或多种：海藻糖、焦磷酸二乙酯处理过的水。

所述核酸扩增体系的冻干保护剂进一步包括以下组分：蔗糖和/或乳糖。

所述核酸扩增体系的冻干保护剂不包括甘露醇。在本发明核酸扩增体系的试验中，加入甘露醇作为冻干保护剂的效果远不如本发明采用的海藻糖、蔗糖、和/或乳糖体系。

为解决上述技术问题，本发明提供了一种如前述中任一项所述应用于核酸扩增体系的冻干保护剂的制备方法，包括以下步骤：将所述组份按照使用的浓度比混匀，即得到冻干保护剂。

为解决上述技术问题，本发明提供了一种如前述任一项所述应用于核酸扩增体系的冻干保护剂的制备方法，包括以下步骤：

步骤1：将所述组份按照使用的浓度比混匀；

步骤2：冷冻干燥，即得到冻干保护剂。

所述冷冻干燥的步骤，进一步包括以下子步骤：

子步骤1：干燥的步骤；

子步骤2：冻干的步骤；

所述子步骤1中，冻干剂和核酸扩增反应试剂的体积比为3.5-7：13-16.5，所述核酸扩增反应试剂为RNA或DNA实时荧光定量PCR反应试剂；

所述子步骤1中，所述干燥的步骤采用冷冻真空干燥；

所述步骤2中，所述冻干的方法包括以下阶段：

预冻阶段：隔板温度下降到-45℃－-55℃，保持时间3-5h；

一次升华阶段：保持2-4h；

二次升华阶段：保持2-4h；

终干燥阶段：保持2-3h。

为解决上述技术问题，本发明还提供了一种所述应用于核酸扩增体系的冻干保护剂的使用方法，包括以下步骤：