[发明专利]灵芝高产菌株选育方法

权利要求书

1.灵芝高产菌株选育方法，其特征在于：其操作步骤如下：

A、菌种活化：取韩国短柄赤芝菌种和日本鹿角灵芝菌种，韩国短柄赤芝菌种与日本鹿角灵芝菌种的比例关系为1:1，将两种菌种用PDA基础培养基于28℃震荡培养5～7d；

B、在其中一种菌种的稳定期将其接种在PDA复合培养基中，放置在28℃的摇床中震荡培养4～6d，另一种菌种在对数生长期将其接种在PDA复合培养基中，放置在28℃的摇床中震荡培养2～4d，PDA复合培养基是在PDA基础培养基的基础之上加入1.5％磷酸二氢钾和0.75％硫酸镁；

C、选择原始高产菌种用于发酵生产；

D、将步骤C的高产菌种通过四至五代传代培养，当菌种的质量下降时，对其进行外部刺激，

E、外部刺激：在无菌环境下，使用20ml匀浆器对菌液进行匀浆处理，再将匀浆后的菌液按照10％的接种量接种在多个新的复合培养液培养；

F、选择筛选优质的菌株进行扩培培养；

G、当步骤E中新的复合培养液中的菌种出现质量下降时，重复操作步骤E、F；

所述步骤C中选择原始高产菌种是选择细胞形态为球型或椭球型，菌丝蔓延速度≥1cm/d，色素产生能力为第2-3d开始产生黄色色素、培养结束时为深黄色，灵芝多糖产量为同批次中最高和胞内灵芝多糖为90％以上的菌种；

所述步骤D中当菌种的质量下降时的依据为：培养液中pH值为2.8-3.0，菌体干重低于5g/L，灵芝多糖产率低于20％，灵芝菌球静置密度为摇瓶静置后发酵液总体积减去上清液后所占体积低于90％，灵芝菌球直径低于2mm或者高于5mm，多个灵芝菌球直径标准差大于2mm，灵芝菌球表面形态趋于光滑，外延菌丝长度低于0.5mm，菌球颜色趋于白色或者褐色；所述步骤E中匀浆处理的时间为10～15个往返。