[发明专利]灵芝高产菌株选育方法

说明书

本专利公开了灵芝高产菌株选育方法，操作方法采用菌种活化、培养、选择原始高产菌种用于发酵生产、四至五代传代培养，当菌种的质量下降时，对其进行外部刺激，经过外部刺激选择筛选优质的菌株进行扩培培养；当新的复合培养液中的菌种出现质量下降时，重复进行外部刺激的方法。本发明为了意在提供一种缩短菌株保藏环节，降低了菌种活化的培养周期，能大量筛选出高产灵芝多糖的菌株选育方法。

技术领域

本发明涉及微生物的发酵技术领域，具体为一种灵芝高产菌株选育方法。

背景技术

目前，不管是在实验室的研究或者工厂工业化生产过程中，发酵产业尤其是丝状真菌发酵都是一个操作复杂，稳定性较差的生产方式，主要存在菌种保存过程中活力会逐渐降低、菌种传代过程中也会随传代次数增加而显著降低、菌种突变率高（这些突变中生长能力减弱和次级代谢产物的降低往往占据了突变的绝大部分比重）等问题，导致很多实验研究或者发酵生产都很难精确预测出发酵终点时的生长状况。而常见的检测方法也难以在短时间内得出结论，即便得出结论需要调整，也难以在为期数日的发酵时间内对发酵结果产生明显的改善，导致发酵过程控制对发酵结果的影响力就相对更弱。因此，菌种的质量就成了影响发酵的十分重要甚至决定性的因素。

而目前的菌种选育通常是通过自然突变高产菌株或者人工诱变手段进行，往往存在诱变周期长，成功率低，工作量大的问题。同时又导致保存过程繁杂，保存菌株在使用前又需要冗长的活化工作，加剧了菌株选育的难度和工作量。

发明内容

本发明为了意在提供一种缩短菌株保藏环节，降低了菌种活化的培养周期，能大量筛选出高产灵芝多糖的菌株选育方法。

本发明提供基础方案是：灵芝高产菌株选育方法，其操作步骤如下：

A、菌种活化：取韩国短柄赤芝菌种和日本鹿角灵芝菌种，韩国短柄赤芝菌种与日本鹿角灵芝菌种的比例关系为1:1，将两种菌种用PDA基础培养基于28℃震荡培养5~7d；

B、在其中一种菌种的稳定期将其接种在PDA复合培养基中，放置在28℃的摇床中震荡培养4~6d，另一种菌种在对数生长期将其接种在PDA复合培养基中，放置在28℃的摇床中震荡培养2~4d，PDA复合培养基是在PDA基础培养基的基础之上加入1.5%磷酸二氢钾和0.75%硫酸镁；

C、选择原始高产菌种用于发酵生产；

D、将步骤C的高产菌种通过四至五代传代培养，当菌种的质量下降时，对其进行外部刺激，

E、外部刺激：在无菌环境下，使用20ml匀浆器对菌液进行匀浆处理，再将匀浆后的菌液按照10%的接种量接种在多个新的复合培养液培养；

F、选择筛选优质的菌株进行扩培培养；

G、当步骤Ｅ中新的复合培养液中的菌种出现质量下降时，重复操作步骤E、F。