[发明专利]一种鹿茸多肽的分离方法在审
申请号: | 201510914036.5 | 申请日: | 2016-05-25 |
公开(公告)号: | CN107434818A | 公开(公告)日: | 2017-12-05 |
发明(设计)人: | 不公告发明人 | 申请(专利权)人: | 新疆厚拾生物科技有限责任公司 |
主分类号: | C07K1/14 | 分类号: | C07K1/14;C07K1/16;C07K1/20 |
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地址: | 841001 新疆维吾尔自治区巴音郭*** | 国省代码: | 新疆;65 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 鹿茸 多肽 分离 方法 | ||
1.一种鹿茸多肽分离纯化的方法,其特征在于,所述方法包括:
A 将冲洗后的鲜鹿茸粉碎,并添加匀浆液;
B 将添加匀浆液后的鲜鹿茸粉进行离心处理,取上清液,真空旋转蒸发得到鹿茸浓缩液,并将鹿茸浓缩液冻干得到鹿茸提取物;
C对鹿茸提取物进行溶解,并对溶解后的鹿茸提取物进行层析,得到活性峰洗脱液,冻干;
D将所述冻干的活性峰洗脱液进行层析,收集活性峰并冻干;
E 对所述步骤D中的活性峰进行反相高相液相层析,并收集活性峰,冻干,得到纯化的鹿茸多肽。
2.根据权利要求1所述的鹿茸多肽分离纯化的方法,其特征在于,所述步骤A中匀浆液为PH3.5 的冰醋酸水溶液。
3.根据权利要求1所述的鹿茸多肽分离纯化的方法,其特征在于,所述步骤B具体包括:将匀浆液以8000rpm进行离心25min,取上清液;
在上清液中加入96%的乙醇使其浓度达到70%,并在5℃条件下存放3小时后进行离心处理,提取上清液,对提取的上清液真空旋转蒸发至浓缩液,冻干得到鹿茸提取物。
4.根据权利要求1所述的鹿茸多肽分离纯化的方法,其特征在于,所述步骤C具体包括:
以PH4.5 HAc-NaAc 缓冲液充分平衡,以3ml/min 流速将[a1] 加入柱内,并以12ml/min 的流速分别用PH4.5 HAc-NaAc 缓冲液、PH5.0 HAc-NaAc 缓冲液洗脱,收集活性峰洗脱液;
将洗脱液用透析袋透析,并冻干。
5.根据权利要求1所述的鹿茸多肽分离纯化的方法,其特征在于,所述步骤D具体包括:用PH5.0 的HAc-NaAc 缓冲液溶解;
装填PH5.0的 HAc-NaAc 缓冲液充分平衡,将[a2] 加入柱内,用PH5.0的HAc-NaAc 缓冲液洗脱,流速为 2ml/min收集活性峰,并冻干。
6.根据权利要求1所述的鹿茸多肽分离纯化的方法,其特征在于,所述步骤E具体包括:用蒸馏水溶解冻干品,并过滤,用异丙醇和水充分平衡,其异丙醇和水的比例为0.42:0.7,进样量为 15mg/ml 0.1ml,洗脱,流速为 2ml/min,检测波长为 280nm;收集活性峰,冻干。
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