[发明专利]一种鹿茸多肽的分离方法

说明书

技术领域

本发明涉及鹿茸多肽分离纯化的方法。

背景技术

近些年来，生物学界陆续发现许多组织都能够自身分泌生长因子。1962 年 Cohen 从小鼠颌下腺中分离得到表皮生长因子；1977 年，Klagsbrun 等从牛肩胛骨分离提纯了具有促进软骨细胞增殖活性的肽类生长因子。我们从马鹿鹿茸中分离纯化得到的多肽，经过检测证明，具有较强的促进表皮细胞和软骨细胞以及肝细胞增殖的活性，但是，由于目前我们不能确定其为天然游离存在的生长因子还是人工提取产物，故暂称其为鹿茸多肽。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明的目的是提供一种鹿茸多肽分离纯化的方法。

本发明的目的通过以下的技术方案来实现：

一种鹿茸多肽分离纯化的方法，该方法包括：

A 将冲洗后的鲜鹿茸粉碎，并添加匀浆液；

B 将添加匀浆液后的鲜鹿茸粉进行离心处理，取上清液，真空旋转蒸发得到鹿茸浓缩液，并将鹿茸浓缩液冻干得到鹿茸提取物；

C对鹿茸提取物进行溶解，并对溶解后的鹿茸提取物进行层析，得到活性峰洗脱液，冻干；

D将所述冻干的活性峰洗脱液进行层析，收集活性峰并冻干；

E 对所述步骤D中的活性峰进行反相高相液相层析，并收集活性峰，冻干，得到纯化的鹿茸多肽。

与现有技术相比，本发明的一个或多个实施例可以具有如下优点：

鹿茸多肽呈淡黄色粉末状，易溶于水，其蛋白含量为 46.7%。

具体实施方式

为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合附图及实施例对本发明作进一步详细的描述。

如图1所示为鹿茸多肽分离纯化的方法，该方法包括：

步骤10 将冲洗后的鲜鹿茸粉碎，并添加匀浆液；

上述匀浆液为PH3.5 的冰醋酸水溶液。

步骤20 将添加匀浆液后的鲜鹿茸粉进行离心处理，取上清液，真空旋转蒸发得到鹿茸浓缩液，并将鹿茸浓缩液冻干得到鹿茸提取物；

该步骤具体包括：将匀浆液以8000rpm进行离心25min，取上清液；

在上清液中加入96%的乙醇使其浓度达到70%，并在5℃条件下存放3小时后进行离心处理，提取上清液，对提取的上清液真空旋转蒸发至浓缩液，冻干得到鹿茸提取物。

步骤30 对鹿茸提取物进行溶解，并对溶解后的鹿茸提取物进行层析，得到活性峰洗脱液，冻干；

以PH4.5 HAc-NaAc 缓冲液充分平衡，以3ml/min 流速将样品加入柱内，并以12ml/min 的流速分别用PH4.5 HAc-NaAc 缓冲液、PH5.0 HAc-NaAc 缓冲液洗脱，收集活性峰洗脱液；

将洗脱液用透析袋透析，并冻干。

步骤40 将所述冻干的活性峰洗脱液进行层析，收集活性峰并冻干；

用PH5.0 的HAc-NaAc 缓冲液溶解；

装填PH5.0的 HAc-NaAc 缓冲液充分平衡，将样品加入柱内，用PH5.0的HAc-NaAc 缓冲液洗脱，流速为 2ml/min收集活性峰，并冻干。

步骤50 对所述步骤40中的活性峰进行反相高相液相层析，并收集活性峰，冻干，得到纯化的鹿茸多肽。

用蒸馏水溶解冻干品，并过滤，用异丙醇和水充分平衡，其异丙醇和水的比例为0.42：0.7，进样量为 15mg/ml 0.1ml，洗脱，流速为 2ml/min，检测波长为 280nm；收集活性峰，冻干。

上述实施例使用破碎法将鹿茸组织粉碎，并通过胶体磨使其细胞破碎，这样保证细胞内物质和细胞间物质均被抽提出来。

虽然本发明所揭露的实施方式如上，但所述的内容只是为了便于理解本发明而采用的实施方式，并非用以限定本发明。任何本发明所属技术领域内的技术人员，在不脱离本发明所揭露的精神和范围的前提下，可以在实施的形式上及细节上作任何的修改与变化，但本发明的专利保护范围，仍须以所附的权利要求书所界定的范围为准。