[发明专利]一种产酸屎肠球菌、抑菌微生态制剂及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及微生物领域，具体地，本发明涉及一种产酸屎肠球菌、抑菌微生态制剂及其应用。

背景技术

随着我国农业养殖结构调整，规模化、集团化养殖已成为发展趋势，养殖户为了追求经济效益最大化，在饲料中添加饲用抗生素、激素及益生菌制剂等，以达到促进动物增重和快速生长的目的。但是添加促生长饲用抗生素等药物会使致病菌的耐药性越来越普遍、耐药谱越来越广，由此引起动物疫病越来越难以控制，形成恶性循环，不但影响畜牧养殖业的可持续发展，还会造成畜禽类产品中残留抗生素和激素的严重超标，直接影响到人类的身体健康。

细菌素是由某些细菌通过基因编码、核糖体合成的具有抑菌生物活性的蛋白或肽类。细菌素与抗生素在生物合成、作用机制、抑菌谱等方面明显不同，细菌素可以安全、有效地使用已达到控制目标病原微生物生长的目的。乳酸菌为人类和动物肠道主要菌群，在动物肠道内可以分泌出乳酸，降低动物肠道的pH值，常用于人和动物益生菌产品。

枯草芽孢杆菌不是肠道的常住菌，只属于过路菌，不会在肠道内长期定植与生长，它会随着食物进入胃肠道，最终又与粪便一起排出体外。若直接添加由枯草芽孢杆菌，由于其在动物肠道内停留时间短，其代谢产物--细菌素还未合成或合成量较少，无法充分发挥抑菌作用。

本发明将枯草芽孢杆菌在体外进行大规模发酵生产细菌素，并将其与乳酸菌进行协同组合，制备出高效抑菌的微生态制剂。该微生态制剂进入动物胃肠道后可快速发挥抑菌作用，有效调节胃肠道的微生态平衡，维护动物健康。

发明内容

本发明的目的在于提供一种产酸屎肠球菌及其抑菌微生态制剂，其具有高效抑菌的能力。

本发明的另一目的提供上述产酸屎肠球菌及其抑菌微生态制剂的应用。

本发明提供的产酸屎肠球菌CE001(Enterococcusfaecium)，其菌种保藏编号为：CGMCCNO.9666。本发明的屎肠球菌，具有良好的产酸性能。

本发明的抑菌微生态制剂，包括枯草芽孢杆菌所产细菌素和本发明上述的产酸屎肠球菌；所述细菌素与屎肠球菌的比例为1g细菌素比2～5亿屎肠球菌活菌数。

本发明所使用的枯草芽孢杆菌可以是现有的细菌素的任意菌株，尤其优选的，本发明所述枯草芽孢杆菌选用购自中国农业微生物菌种保藏管理中心，其保藏号为ACCC10619的菌株。

本发明的上述抑菌微生态制剂的制备方法，包括以下步骤：

1)将制备的枯草芽孢杆菌所产细菌素按比例加入到发酵后期的屎肠球菌发酵液中，搅拌混合均匀；

2)将混合后的发酵液固液分离获得菌泥，在菌泥中加入干燥保护剂，所述菌泥与干燥保护剂的质量体积比(g/L)为5％～25％，采用制粒、冻干或喷雾干燥制成抑菌微生态制剂。

进一步地，根据本发明的制备方法，所述细菌素的制备包括以下步骤：

1)将枯草芽孢杆菌菌株接种到发酵用培养液中，在37～39℃条件下，培养48～50h，得到发酵液；

2)将发酵液经5000～12000r/m离心5-30min中取上清液，在上清液中缓慢加入硫酸铵固体粉末进行盐析，边加边搅拌，直到饱和度达20～80％，然后在4～5℃条件下静置4～2h，再在2～10℃条件下、以5000～12000r/m转速离心10～30min，弃去上清液得到细菌素。

本发明所述的枯草芽孢杆菌菌株发酵用培养液可以使用本领域公知的任意用于枯草芽孢杆菌的培养液，优选地，所用培养液包含(重量比)：玉米粉0.5％～3.5％、豆饼粉1.0％～5.0％、鱼粉0.01％～0.5％、葡萄糖0.2％～2.0％、碳酸钙0.5％～5.0％、硫酸铵0.001％～0.2％、磷酸氢二钾0.001％～0.2％、硫酸镁0.001％～0.2％、硫酸锰0.001％～0.2％，纯净水1升，pH为7.0～7.5。

所述的细菌素的活力单位可达17361.68U/mg，可抑制多种革兰氏阴性和革兰氏阳性病原菌。

根据本发明的制备方法，所述屎肠球菌发酵液的制备方法包括以下步骤：

1)在种子培养基中，35～45℃有氧或兼性条件下培养屎肠球菌18～24小时，成为一级种子；

2)将一级种子液接种在种子罐中进行扩大培养，在35～45℃有氧或兼性条件下培养18～24小时，成为二级种子；

3)将获得的二级种子液接种在发酵罐中进行发酵培养，在30～45℃有氧或兼性条件下，采用定时或连续补料分批发酵方式培养18～36小时；