[发明专利]一种番茄Mi-1基因和ty-5基因的多重PCR检测方法有效
申请号: | 201510918171.7 | 申请日: | 2015-12-10 |
公开(公告)号: | CN105463082B | 公开(公告)日: | 2018-10-30 |
发明(设计)人: | 王银磊;赵统敏;余文贵;赵丽萍;杨玛丽;姜静;李亚茹 | 申请(专利权)人: | 江苏省农业科学院 |
主分类号: | C12Q1/686 | 分类号: | C12Q1/686 |
代理公司: | 常州佰业腾飞专利代理事务所(普通合伙) 32231 | 代理人: | 翁斌 |
地址: | 210014 江苏省南京*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 番茄 mi 基因 ty 多重 pcr 检测 方法 | ||
本发明公开了一种番茄Mi‑1基因和ty‑5基因的多重PCR检测方法,其包括:1)从番茄叶中提取待检测番茄叶片DNA;2)以上述番茄叶片提取获得的DNA为模板,利用Mi‑1和ty‑5的引物,通过建立的多重PCR反应体系,对待测样品进行多重PCR扩增;3)PCR产物酶切及电泳检测;4)对待测番茄样品中是否含有Mi‑1基因和ty‑5基因进行鉴定等步骤。本发明用于快速鉴定番茄材料中是否含有根结线虫抗病基因Mi‑1和番茄黄化曲叶病抗性基因ty‑5。
技术领域
本发明涉及生物检测技术领域,具体涉及一种番茄Mi-1基因和ty-5基因的多重PCR检测方法。
背景技术
番茄是一种重要的蔬菜作物,为蔬菜经济的发展和农民增收做出了巨大的贡献。然而在番茄驯化的过程中,很多的抗性基因都没有被转入栽培番茄中,大量的抗病基因仍然分布在野生番茄中。选育抗多种病害的番茄品种成为了保障番茄产业发展的重要目标。
番茄根结线虫病是一种土传性的病害,由于设施面积的逐年扩大,连作重茬问题难以解决,加上根结线虫寄主范围广泛的特点,使得该病对番茄生产的危害逐渐增大。通过胚挽救的方法,将秘鲁番茄中的根结线虫抗性基因Mi-1导入到栽培番茄中,极大的改善了番茄对根结线虫的抗性。通过基因定位,番茄6号染色体短臂端,CAPS标记REX-1与该基因连锁。
番茄黄化曲叶病毒(Tomato yellow leaf curl virus,TYLCV)病是近年来传入我国并大面积爆发的一种番茄病害,发生之初对番茄生产造成了巨大的危害,该病毒主要通过携带TYLCV的烟粉虱进行传播。发生之初,我国的番茄品种中均无抗原,之后通过对国外抗原材料的引进、筛选和鉴定,选育获得了适合我国栽培环境的抗TYLCV品种。目前栽培品种中的抗原基因主要为Ty-1、Ty-2和Ty-3,但是长期使用这些基因存在抗性被变异病毒突破的风险。ty-5基因是目前新发现的抗TYLCV基因,该基因与SLNACI具有连锁关系。
目前选育同时含有抗根结线虫和TYLCV的番茄品种对于番茄生产具有重要的意义。在选育的过程中利用分子标记辅助选择的手段可以加速育种的进程。但对于不同的基因分别进行鉴定,费时、费力,成本也很高。在多抗基因聚合育种的过程中,如果可以将根结线虫和TYLCV抗性基因的分子鉴定整合成多重PCR体系,可以极大的提高育种的效率,降低检测过程的成本。但在对现有两个基因的标记进行分析,多态性片段由于存在条带间大小相近,多态性重叠,不利于设计多重PCR体系。
发明内容
为克服现有技术的缺陷,本发明的目的在于提供一种番茄Mi-1基因和ty-5基因的多重PCR检测方法,用于快速鉴定番茄材料中是否含有根结线虫抗病基因Mi-1和番茄黄化曲叶病抗性基因ty-5。
为实现上述目的,本发明所采用的技术方案如下:
一种番茄Mi-1基因和ty-5基因的多重PCR检测方法,其包括以下步骤:
1)从番茄叶中提取待检测番茄叶片DNA;
2)以上述番茄叶片提取获得的DNA为模板,利用Mi-1和ty-5的引物,通过建立的多重PCR反应体系,对待测样品进行多重PCR扩增;
3)PCR产物酶切及电泳检测;
4)对待测番茄样品中是否含有Mi-1基因和ty-5基因进行鉴定。
进一步的方案,本发明所述的步骤1)中的番茄叶取自育种、野生、分离群体番茄品种的番茄叶。
进一步的方案,本发明所述的步骤2)中,
ty-5引物为:
NACI-new F:TTGGATCTGTTCCGCCATG
NACI-new R:TTCCTGCTGCTCGGTTCG;
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