[发明专利]一种能拆分（＋/-）γ-内酰胺得到（+）γ-内酰胺的芽孢杆菌及其筛选和应用有效
| 申请号： | 201510918447.1 | 申请日： | 2015-12-11 |
| 公开（公告）号： | CN105567584B | 公开（公告）日： | 2019-03-08 |
| 发明（设计）人： | 王金昌;靳亮;王建军 | 申请（专利权）人： | 江西省科学院微生物研究所 |
| 主分类号： | C12N1/20 | 分类号： | C12N1/20;C12N1/02;C12P41/00;C12R1/07 |
| 代理公司： | 广州三环专利商标代理有限公司 44202 | 代理人： | 张艳美;胡全利 |
| 地址： | 330096 江西省*** | 国省代码： | 江西;36 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 拆分 内酰胺 得到 芽孢 杆菌 及其 筛选 应用 | ||
1.一种能拆分(+/-)γ－内酰胺得到(+)γ－内酰胺的芽孢杆菌，其特征在于，所述芽孢杆菌为阿氏芽胞杆菌(Bacillus aryabhattai)C4，于2015年10月10日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCC NO：M2015597。
2.一种权利要求1所述芽孢杆菌的应用，其特征在于，采用所述芽孢杆菌，在水相体系中，以(+/-)γ－内酰胺为底物，进行不对称水解拆分制备得到所述(+)γ－内酰胺。
3.如权利要求2中所述芽孢杆菌的应用，其特征在于，所述以(+/-)γ－内酰胺为底物，进行不对称水解拆分制备得到所述(+)γ－内酰胺的具体步骤如下：
(1)微生物菌株：权利要求1所述的芽孢杆菌；
(2)先将步骤(1)中所述的芽孢杆菌进行离心获得湿菌体备用；
(3)拆分体系的配制：用磷酸盐缓冲液配制2g/L～600g/L的(+/-)γ－内酰胺；
(4)拆分(+/-)γ－内酰胺得到(+)γ－内酰胺：将步骤(3)的配制好的(+/-)γ－内酰胺加入到在步骤(2)的湿菌体中进行反应；
(5)拆分液的处理和分析：将步骤(4)中所得微生物拆分反应之后的液体，离心除去菌体，取上清液采用乙酸乙酯萃取，萃取液稀释后进行手性HPLC检测；
(6)产物的分离提取：采用二氯甲烷萃取步骤(5)中所得菌体，并依次经过干燥、蒸发浓缩、冷却结晶，最后得到所述的(+)γ－内酰胺。
4.如权利要求3中所述芽孢杆菌的应用，其特征在于，所述步骤(3)中磷酸盐缓冲液的pH3～10，浓度为0.01～0.5mol/L。
5.如权利要求3中所述芽孢杆菌的应用，其特征在于，所述步骤(4)中菌体终浓度为0.5g/L～100g/L湿菌体，反应温度为20～60℃，反应时间为1～24h，
摇床转速为100～300rpm。
6.如权利要求3中所述芽孢杆菌的应用，其特征在于，所述步骤(6)中在20～80℃下蒸发浓缩、1～4℃下冷却结晶。
7.如权利要求3中所述芽孢杆菌的应用，其特征在于，所述步骤(6)中所述(+)γ－内酰胺的光学纯度为95.0％～100％，化学纯度为95％～99％。
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