[发明专利]一种能拆分（＋/-）γ-内酰胺得到（+）γ-内酰胺的芽孢杆菌及其筛选和应用

说明书

本发明属于微生物技术领域，具体涉及一种能拆分（＋/‑）γ‑内酰胺得到（+）γ‑内酰胺的芽孢杆菌及用其拆分（＋/‑）γ‑内酰胺的方法；本发明方法利用从土壤中筛选获得的能拆分（＋/‑）γ‑内酰胺得到（+）γ‑内酰胺的微生物菌株，鉴定为阿氏芽胞杆菌(Bacillus aryabhattai)C4；其在水相体系中立体选择性水解（＋/‑）γ‑内酰胺，制备（+）γ‑内酰胺。在300g/L底物浓度条件下，经萃取、干燥、蒸发浓缩、冷却结晶得到产物（+）γ‑内酰胺的光学纯度(Ee值)为95.0％～99.9％，化学纯度为95％～99％。该微生物催化不对称水解（＋/‑）γ‑内酰胺制备（+）γ‑内酰胺的方法具有高立体选择性、高反应产率和高产物浓度的特点。

技术领域

本发明属于微生物技术领域，具体涉及一种能拆分(+/-)γ-内酰胺得到(+)γ-内酰胺的芽孢杆菌，该芽孢杆菌为阿氏芽胞杆菌(Bacillus aryabhattai)C4。

背景技术

γ-内酰胺的两个光学对映体都是许多碳环核苷类似物合成的手性前体。趋化因子受体抗结剂MK-0812和糖尿病候选药物美格列汀，可由(+)γ-内酰胺合成。产物(+)γ-内酰胺经溴化进行骨架重排生成(-)γ-内酰胺，以光学纯的(-)γ-内酰胺为起始化合物的酶化学合成方法，是合成阿巴卡韦和帕拉米韦这两种治疗艾滋病和禽流感及甲流感的特效药物的最简便、经济的方法。

在发现微生物能选择性拆分(+/-)γ-内酰胺得到(+)γ-内酰胺之前，文献报道的制备光学纯的(+)γ-内酰胺一般采用化学不对称合成的方法。使用这种方法的缺点在于：原料昂贵，步骤烦琐，成本较高，且会造成较严重的环境污染，同时产物中通常含有金属杂质。与此形成鲜明对比的是，用微生物进行催化合成光学纯的(+)γ-内酰胺具有反应条件温和效率高，产物纯度高及对环境友好的特点。有关该方法的研究主要集中在筛选高对映选择性的拆分(+/-)γ-内酰胺得到 (+)γ-内酰胺的生产菌株，暂无相关报道。

发明内容

为了解决上述问题，本发明的目的之一在于提供一种能拆分(+/-)γ-内酰胺得到(+)γ-内酰胺的芽孢杆菌。

该芽孢杆菌为阿氏芽胞杆菌(Bacillus aryabhattai)C4，于2015年10月 10日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCC NO:M 2015597，保藏单位地址：中国武汉武汉大学。

本发明的目的之二是提供了所述能拆分(+/-)γ-内酰胺得到(+)γ-内酰胺的芽孢杆菌的培养方法。

本发明的目的之三是提供了所述芽孢杆菌拆分(+/-)γ-内酰胺得到(+)γ-内酰胺的方法。

本发明是通过以下技术方案来实现的：

一种能拆分(+/-)γ-内酰胺得到(+)γ-内酰胺的芽孢杆菌；其在中国典型培养物保藏中心的保藏编号为：CCTCC NO:M 2015597。

所述芽孢杆菌的筛选，具体为：

(1)初培养：从湖底取污泥，用无菌水稀释后涂布于培养基上，30℃培养2天；