[发明专利]一种同时分析人基因组DNA 24个基因座的荧光标记复合扩增的试剂盒及其应用

说明书

本发明公开了一种同时分析人基因组DNA 24个基因座的荧光标记复合扩增的试剂盒及其应用；所述的24个基因座为：D16S539、D6S477、D15S659、D10S1248、D1S1656、D21S2055、D4S2366、D2S441、D3S1744、D22‑GATA198B05、D3S3045、D11S2368、D17S1290、D10S2325、D14S608、D8S1132、D7S3048、D5S2500、D7S1517、D18S535、D10S1435、D13S325、D19S253及性别基因座Amelogenin。本发明将24个基因座分为4组，共涉及5种颜色的荧光标记；本发明的荧光标记复合扩增系统的灵敏度高，在DNA模板量为0.12 ng的条件下，可检出全部24个基因座；适用于血滤纸、FTA卡采集样本的直接扩增。

技术领域

本发明涉及一种24个基因座的荧光标记复合扩增检验系统，具体是涉及一种同时分析人基因组DNA 24个基因座的荧光标记复合扩增的试剂盒及其应用。

背景技术

短串联重复序列基因座(STR)是目前普遍应用的遗传标记。STR标记与其他遗传标记物相比，STR基因座片段小、容易扩增，更适用于微量和降解检材，各基因座的扩增条件相近而能够复合扩增，因而具有快速、高效、准确、灵敏、信息量大等优点。尤其是在建立DNA数据库方面，与以往RFLP等技术相比，STR复合扩增技术具有极大的优越性。因此美国FBI进行了大量研究，选择了13个STR基因座用于建立DNA数据库——CODIS(Combined DNA IndexSystem)：CSF1PO、D3S1358、D5S818、D7S820、D8S1179、D13S317、D16S539、D18S51、D21S11、FGA、TH01、TPOX、vWA。这些STR基因座通常被称为13个核心基因座。

正是因为STR基因座具备以上优点和应用前景，法医界以及一些公司均对其进行了大规模的开发性研究。90年代中后期以美国ABI(Applied Biosystems,USA)为代表的技术型公司建立起复合扩增和荧光检测体系，并诞生了最具代表性的是ABI公司的Identifiler^TM和Promega(USA)公司的PowerPlex-16荧光检测试剂盒。

为了提供一种新的荧光标记复合扩增检验系统，使其更适合于中国人群在个体识别和亲子鉴定等方面的应用，进一步提高系统的累积个体识别率和累积非父排除率，该检验系统中必须包含数目更多的、在中国人群中具有高度遗传多态性的STR基因座。

发明内容

本发明的目的在于：提供一种同时分析人基因组DNA 24个基因座的荧光标记复合扩增的试剂盒及其应用，所述试剂盒是包含24个基因座的复合扩增系统，同时通过五色荧光检测体系检测，来进行个体识别和亲子鉴定的STR复合检验系统。涉及检测人基因组中具有多态性的STR遗传标记。本发明特别涉及用聚合酶链式反应在一个体系中同时扩增多个短串联重复基因座。该系统可以应用于公安部门日常检案、个体识别、亲子鉴定以及考古等方面，有助于解决公安部打拐数据库一子多父母问题和亲子鉴定中突变和近亲鉴定问题。

为了实现本发明的目的，采用如下技术方案：

一种同时分析人基因组DNA 24个基因座的荧光标记复合扩增的试剂盒，所述的24个基因座为：D16S539、D6S477、D15S659、D10S1248、D1S1656、D21S2055、D4S2366、D2S441、D3S1744、D22-GATA198B05、D3S3045、D11S2368、D17S1290、D10S2325、D14S608、D8S1132、D7S3048、D5S2500、D7S1517、D18S535、D10S1435、D13S325、D19S253及性别基因座Amelogenin；该试剂盒包括的24个基因座对应的引物及其浓度见表1。

表1