[发明专利]用于在真菌细胞中表达基因的启动子

说明书

本发明申请是基于申请日为2011年11月30日、申请号为201180066380.3(国际申请号为PCT/US2011/062663)、名称为“用于在真菌细胞中表达基因的启动子”的发明专利申请的分案申请。

对相关申请的交叉引用

本申请要求2010年11月30日提交的美国临时申请系列号61/418,302的权益，该申请通过提述并入本文。

涉及序列表

本申请包含计算机可读形式的序列表。所述计算机可读形式通过提述并入本文。

发明背景

技术领域

本发明涉及产生多肽的方法。本发明亦涉及分离的启动子和涉及包含可操作地连接于编码多肽的多核苷酸的启动子的核酸构建体、载体和宿主细胞。

背景技术

在真菌宿主细胞，例如丝状真菌细胞中，多肽的重组表达，可对于以商业上相关的量产生所述多肽提供更理想的媒介(vehicle)。

多肽的重组产生伴随构建表达盒，其中将编码多肽的DNA置于启动子的表达调控下，所述启动子从基因切出并适于所述宿主细胞。将该表达盒导入宿主细胞，通常通过质粒介导的转化。然后，多肽的产生通过在包含在所述表达盒上的启动子的合适功能所需的诱导条件下培养经转化的宿主细胞来实现。

将真菌宿主细胞用于多肽的重组产生一般需要得到适于在宿主细胞中调控所述多肽表达的启动子。因此，在本领域具有对调控基因的重组表达的新颖启动子的需要。

Melin等,2002,Mol.Genet.Genomics267(6):695-702公开了构巢曲霉(Aspergillusnidulans)concanamycin(伴刀球霉素)诱导的蛋白C。Lu等,2010,Microb.CellFact.9:23公开了黑曲霉(Aspergillusniger)中的cipC蛋白。

本发明提供了改善的用于在真菌宿主细胞中产生多肽的方法。

发明内容

本发明涉及用于产生多肽的方法，其包括：(a)在有助于产生所述多肽的培养基中培养真菌宿主细胞，其中所述真菌宿主细胞包含编码多肽的多核苷酸，所述多核苷酸可操作地连接于启动子，所述启动子选自下组：(i)启动子，其包含核苷酸序列，所述核苷酸序列与SEQIDNO:1，SEQIDNO:2，SEQIDNO:3，SEQIDNO:4，SEQIDNO:5，SEQIDNO:6，SEQIDNO:7，SEQIDNO:8，SEQIDNO:31，或SEQIDNO:32具有至少60％序列同一性；(ii)启动子，其包含核苷酸序列，所述核苷酸序列在至少中等严格条件下与以下杂交：SEQIDNO:1，SEQIDNO:2，SEQIDNO:3，SEQIDNO:4，SEQIDNO:5，SEQIDNO:6，SEQIDNO:7，SEQIDNO:8，SEQIDNO:31，或SEQIDNO:32；或其全长互补链；(iii)启动子，其包含SEQIDNO:1，SEQIDNO:2，SEQIDNO:3，SEQIDNO:4，SEQIDNO:5，SEQIDNO:6，SEQIDNO:7，SEQIDNO:8，SEQIDNO:31，或SEQIDNO:32；(iv)启动子，其包含(i)，(ii)，或(iii)的保持启动子活性的亚序列；和(v)(i)，(ii)，(iii)，或(iv)的突变、杂合或串联(tandom)启动子；其中所述编码多肽的多核苷酸对于所述启动子是外源的；和(b)从培养基分离所述多肽。