[发明专利]动物样品分级去除脂肪的方法

说明书

本发明涉及一种生物样品处理方法，具体为动物样品分级去除脂肪的方法，包括(1)浓硫酸除脂，样品初级净化；(2)溶剂淋洗收集，样品二级净化。本发明提供的动物样品分级去除脂肪的方法，能够更彻底的去除动物样品中的脂肪类物质，有效地降低样品中的脂类物质对后续仪器的影响，提高了样品的检出效率，降低了样品的检出限，更有利于痕量非极性有机污染物的检测。

技术领域

本发明涉及一种生物样品处理方法，具体为动物样品分级去除脂肪的方法。

背景技术

由于生物样品脂肪含量较高，在进行样品分析时脂肪的存在对仪器的影响较大，造成仪器的基线升高，影响仪器测定的准确率。所以在进行样品分析之前必须要对样品中的脂肪进行去除，以减少对仪器的损害。

现有的技术中，大多数采用一级净化处理，只采用层析柱，而且层析柱是一根柱子。并没有对样品进行多级净化处理，这样的生物样品进行净化之后，容易造成杂质含量高，脂肪净化不彻底的现象，而且对生物样品总量的要求也会受到影响，如果样品量过大，则净化不彻底。

发明内容

针对上述技术问题，本发明提供一种动物样品分级去除脂肪的方法，通过二级净化方式，提高生物样品前处理中脂肪的去除率和样品处理容量，进一步优化非极性有机污染物的样品前处理技术，提高样品的检测水平。

具体技术方案为：

动物样品分级去除脂肪的方法,具体包括以下步骤：

(1)浓硫酸除脂，样品初级净化

将样品干燥、研磨后，经过萃取，萃取提取液旋转浓缩，用正己烷将旋转蒸发后的样品转移至玻璃样品瓶，加入质量浓度为95-98％浓硫酸，涡旋振荡，混合均匀后进行离心处理，收集上清液；

再加入质量浓度为95-98％浓硫酸，按照上述同样的步骤净化两次，收集上清液；

(2)溶剂淋洗收集，样品二级净化

将用浓硫酸除脂后收集的上层清液使用层析柱进行进一步净化处理；层析柱包括纯化柱、净化柱。

具体的过程为：先用正己烷将纯化柱、净化柱润湿，将气泡赶出，将柱子压实；将待净化的浓缩样品用滴管移入纯化柱中，保证样品与纯化柱充分接触交换；然后将30mL正己烷用滴管移入纯化柱中，以60滴/分钟的流速流出，将收集液载入净化柱，此时流出的淋洗液不进行收集；待纯化柱中的液体完全流干后，移走纯化柱，然后用30mL正己烷和二氯甲烷混合物洗脱净化柱，正己烷和二氯甲烷的体积比为7:3；洗脱液用平底烧瓶进行收集；将收集的样品浓缩液，保存在-20℃冰箱中，待测。

其中，纯化柱从上到下依次装入4g无水硫酸钠、8g酸性硅胶、1g硅胶；净化柱从上到下依次装入4g无水硫酸钠、8g酸性氧化铝，干法填柱。

硅胶为60-200目；酸性氧化铝为50-200目；硅胶在180±2℃条件下活化12h，冷却至室温；酸性氧化铝在170±2℃条件下活化12h，冷却至室温。

酸性硅胶通过以下方法制备所得：加入浓硫酸对硅胶进行酸化处理，硫酸占总重量30％，添加过程中用滴管逐滴加入，边滴加边用力振荡防止结块，浓硫酸全部添加完后超声振荡30min，放置12h平衡。

本发明提供的动物样品分级去除脂肪的方法，能够更彻底的去除动物样品中的脂肪类物质，有效地降低样品中的脂类物质对后续仪器的影响，提高了样品的检出效率，降低了样品的检出限，更有利于痕量非极性有机污染物的检测。

附图说明

图1为本发明的方法流程示意图；

图2为层析柱填充示意图；

图3为实施例一溴到六溴联苯醚的气相色谱升温程序；

图4为实施例的一溴到六溴联苯醚的谱图；