[发明专利]一种利用芽孢杆菌生产抗氧化肽的发酵方法及应用在审
申请号: | 201510923532.7 | 申请日: | 2015-12-11 |
公开(公告)号: | CN105713941A | 公开(公告)日: | 2016-06-29 |
发明(设计)人: | 李秉钧;王轰;冯俊荣;牟伟丽;艾冰花 | 申请(专利权)人: | 烟台大学 |
主分类号: | C12P21/00 | 分类号: | C12P21/00;C07K1/34;C12R1/07 |
代理公司: | 北京国智京通知识产权代理有限公司 11501 | 代理人: | 孙文彬 |
地址: | 264005 山*** | 国省代码: | 山东;37 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 利用 芽孢 杆菌 生产 氧化 发酵 方法 应用 | ||
1.一种利用芽孢杆菌生产抗氧化肽的发酵方法:其特征在于,包括如下步骤:
步骤1、制备发酵多肽液,具体为:
原料烘干;打碎;脱脂处理;脱脂后的处理:使用0.22μm规格的滤膜将原料过滤除去脂肪后,在70℃下将原料烘24h备用;加pH为6.8、0.05mol/L的磷酸缓冲液灭菌;接种,种子液培养基:牛肉膏0.3%,蛋白胨1%,氯化钠0.5%,pH7.0;接种量2%;发酵;90℃,10min灭酶;5000r/min离心,20min;
步骤2、对步骤1中发酵多肽液进行纯化,具体为:
4000r/min,20min发酵液依次经过离心,三层滤纸过滤,0.22μm滤膜过滤澄清后,取适量发酵液进行超滤转数为200rpm,依次使用截留分子质量为5kd和3kd的膜包进行超滤;当过滤至发酵液体积剩下原体积的1/5时,补加蒸馏水至原体积;此时收集滤过液并分别取滤过液和截留液适量进行多肽含量的测定,测定方法采用双缩脲法;重复补水几次并分别测定滤过液和截留液中的多肽含量,直到截留液以及滤过液中多肽含量相对恒定,则小分子肽已经被滤过,而大分子肽被截流。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述步骤一中,原料选取鲅鱼加工边角料,鱼肉,70℃烘24h。
3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述步骤一中,脱脂处理先用乙醇体积mL:原料质量g=1:4、再用异丙醇体积mL:原料质量g=1:2脱脂。
4.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述步骤一中,采用磷酸缓冲液灭菌的条件为温度120℃、时间30min。
5.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述步骤一中,发酵条件为:4号菌最优发酵条件为:菌龄为26h,培养液初始pH为6.8,温度为30℃、料液比2.90%,发酵时间48h;其中料液比、温度、初始pH值对抗氧化活性的影响最为显著;得到的总抗氧化能力为570.11U。
6.权利要求1-5任一方法在制备抗氧化肽方面的应用。
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