[发明专利]一种利用芽孢杆菌生产抗氧化肽的发酵方法及应用

权利要求书

1.一种利用芽孢杆菌生产抗氧化肽的发酵方法：其特征在于，包括如下步骤：

步骤1、制备发酵多肽液，具体为：

原料烘干；打碎；脱脂处理；脱脂后的处理：使用0.22μm规格的滤膜将原料过滤除去脂肪后，在70℃下将原料烘24h备用；加pH为6.8、0.05mol/L的磷酸缓冲液灭菌；接种，种子液培养基：牛肉膏0.3％，蛋白胨1％，氯化钠0.5％，pH7.0；接种量2％；发酵；90℃，10min灭酶；5000r/min离心，20min；

步骤2、对步骤1中发酵多肽液进行纯化，具体为：

4000r/min，20min发酵液依次经过离心，三层滤纸过滤，0.22μm滤膜过滤澄清后，取适量发酵液进行超滤转数为200rpm，依次使用截留分子质量为5kd和3kd的膜包进行超滤；当过滤至发酵液体积剩下原体积的1/5时，补加蒸馏水至原体积；此时收集滤过液并分别取滤过液和截留液适量进行多肽含量的测定，测定方法采用双缩脲法；重复补水几次并分别测定滤过液和截留液中的多肽含量，直到截留液以及滤过液中多肽含量相对恒定，则小分子肽已经被滤过，而大分子肽被截流。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤一中，原料选取鲅鱼加工边角料，鱼肉，70℃烘24h。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤一中，脱脂处理先用乙醇体积mL：原料质量g＝1：4、再用异丙醇体积mL：原料质量g＝1：2脱脂。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤一中，采用磷酸缓冲液灭菌的条件为温度120℃、时间30min。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤一中，发酵条件为：4号菌最优发酵条件为：菌龄为26h，培养液初始pH为6.8，温度为30℃、料液比2.90％，发酵时间48h；其中料液比、温度、初始pH值对抗氧化活性的影响最为显著；得到的总抗氧化能力为570.11U。

6.权利要求1-5任一方法在制备抗氧化肽方面的应用。