[发明专利]一种高通量筛选啤酒酵母的方法

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种高通量筛选啤酒酵母的方法。

背景技术

高通量筛选(Highthroughputscreening，HTS)技术是指以分子水平和细胞水平 的实验方法为基础，以微板形式作为实验工具载体，以自动化操作系统执行试验过程， 以灵敏快速的检测仪器采集实验结果数据，以计算机分析处理实验数据，在同一时间 检测数以千万的样品，并以得到的相应数据库支持运转的技术体系。目前该技术在国 外已经相对成熟，随着科技的发展，多种全自动高通量筛选系统相继出现。自动高通 量筛选系统可以自动连续的进行培养基灭菌，倒平板，挑取单菌落，分装发酵培养基， 接种，抽提，液相分析和数据自动收集处理等过程。但目前我国的高通量微生物筛选 研究才刚刚起步，开展的高通量筛选技术大多都是应用于动物细胞培养或单细胞微好 氧的微生物培养。相对传统的摇瓶筛选，HTS技术具有微量、快速、灵敏、准确和操 作方便等优点。

在啤酒酿造过程中，最初双乙酰被认为是啤酒中污染的乳酸菌所产生的，直到20 世纪60年代，人们才发现双乙酰是酵母正常的中间代谢物。这一发现对于在啤酒酿造 过程中对双乙酰的调控起到了至关重要的作用。啤酒中的双乙酰不仅是影响啤酒风味 的重要因素，而且还是衡量啤酒成熟的主要依据。它具有挥发性和强烈的刺激性，当 其含量过高时(淡色啤酒中≥1.5mg/L)，啤酒会呈现出馊饭味，严重破坏啤酒的风味， 并影响啤酒的感官质量。国家标准中优级淡色啤酒要求双乙酰含量在0.13mg/L以下。 传统的啤酒酿造过程中，啤酒酵母产生的双乙酰在发酵后期和贮酒期由酵母重新吸收 还原成丁二醇。但在后发酵和贮酒过程中，酵母数量少，且还原双乙酰的速度慢，造 成双乙酰还原周期长。所以在啤酒酿造过程中，双乙酰含量控制方法的好坏是影响啤 酒酿造周期的主要因素之一。

啤酒酵母作为影响啤酒生产的众多因素之一，在啤酒生产中起着至关重要的作用。 但由于酵母易受外界条件的影响而发生变异、衰老、混杂，因此要保持酵母菌种的纯 粹和强壮，对其进行筛选就成为啤酒厂非常重要而且是经常性的工作。啤酒厂应该根 据自身的生产情况和产品特点，选择理想的酵母纯菌株。酵母菌株的选育工作在啤酒 的发酵生产中必不可少。无论是用传统诱变、用现代基因工程手段对缩短发酵周期酵 母菌株的改造，还是菌株的复壮，都需要从众多的单菌株中挑选，而目前常用的筛选 方法，都是先从特定的平板上挑选单菌落，然后通过试管或小摇瓶发酵进行初筛，再 用量筒(EBC管)进行复筛。由于摇瓶初筛操作简单，但是工作量大，同时人为误差 也大，并且每次筛选数量有限，筛选工作速度慢，因此，需要建立一套属于啤酒酵母 菌株的高通量筛选模型。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种选育目的啤酒酵母的方法。

本发明提供的选育目的啤酒酵母的方法包括如下步骤：将n个啤酒酵母分别接种 于含有麦汁培养基的微孔细胞培养板的各孔中，培养，检测培养后孔中n个啤酒酵母 的OD值，根据所述培养后孔中n个啤酒酵母的OD值选育目的啤酒酵母；

n为大于等于4的正整数。

上述方法中，所述微孔细胞培养板为96孔细胞培养板。

上述方法中，

所述培养的时间为10-12h；

所述培养的时间具体为11h。

上述方法中，

所述培养的温度为29-31℃。

所述培养的温度具体为30℃。

上述方法中，所述啤酒酵母在所述麦汁培养基中的接种浓度为10×10⁶个/ml。

上述方法中，根据培养后孔中n个啤酒酵母的OD值选育目的啤酒酵母为选取波 长600nm条件下OD值在0.9-1.6的啤酒酵母。

上述方法中，所述n个啤酒酵母为8902、68obg、0002和O.K.3。

上述方法中，所述麦汁琼脂培养基的制备方法：在液体麦汁培养基中加2％的琼 脂粉。

本发明的另一个目的是提供一种培养啤酒酵母的方法。

本发明提供的培养啤酒酵母的方法包括如下步骤：将啤酒酵母接种到含有麦汁培 养基的微孔细胞培养板中，培养。

上述方法中，

所述培养的时间为10-12h，所述培养的时间具体为11h；