[发明专利]一种水产品中副溶血性弧菌和霍乱弧菌的双重LAMP检测引物及试剂盒

权利要求书

1.一种水产品中副溶血性弧菌和霍乱弧菌的双重LAMP检测引物，其特 征在于：包括3对霍乱弧菌LAMP扩增引物和3对副溶血性弧菌LAMP扩 增引物，3对霍乱弧菌LAMP扩增引物具体如下：

内引物ompw-FIP，序列信息见SEQIDNo.1，

内引物ompw-BIP，序列信息见SEQIDNo.2，

外引物ompw-F3，序列信息见SEQIDNo.5，

外引物ompw-B3，序列信息见SEQIDNo.6，

环引物ompw-LF，序列信息见SEQIDNo.9，

环引物ompw-LB，序列信息见SEQIDNo.10；

3对副溶血性弧菌LAMP扩增引物具体如下：

内引物toxR-FIP，序列信息见SEQIDNo.3，

内引物toxR-BIP，序列信息见SEQIDNo.4，

外引物toxR-F3，序列信息见SEQIDNo.7，

外引物toxR-B3，序列信息见SEQIDNo.8，

环引物toxR-LF，序列信息见SEQIDNo.11，

环引物toxR-LB，序列信息见SEQIDNo.12。

2.一种采用权利要求1的引物制备的水产品中副溶血性弧菌和霍乱弧菌 的双重LAMP检测试剂盒，其特征在于，包括双重LAMP扩增反应液，所 述双重LAMP扩增反应液以总体积25μL计由以下组分混合而成：

反应缓冲液12.5μL，内引物ompw-FIP1μL，内引物ompw-BIP1μL，内 引物toxR-FIP1μL，内引物toxR-BIP1μL，外引物ompw-F30.125μL， 外引物ompw-B30.125μL，外引物toxR-F30.125μL，外引物toxR-B3 0.125μL，环引物ompw-LF0.5μL，环引物ompw-LB0.5μL，环引物 toxR-LF0.5μL，环引物toxR-LB0.5μL，BstDNA聚合酶1μL，钙黄 绿素1μL，DNA模板2μL，ddH₂O余量。

3.根据权利要求1所述的双重LAMP检测试剂盒，其特征在于：所述反 应缓冲液各组分如下：20mmol/LTris-HCl，6.5mmol/LMgSO4，10mmol/L KCl，10mmol/L(NH4)₂SO₄，0.1％TritonX-100，1.6mol/L甜菜碱，1.4 mmol/LdNTPs，ddH₂O余量。

4.根据权利要求2或3所述的双重LAMP检测试剂盒，其特征在于：内 引物ompw-FIP、内引物ompw-BIP、内引物toxR-FIP及内引物toxR-BIP的 浓度均为20μmol/L。

5.根据权利要求2或3所述的双重LAMP检测试剂盒，其特征在于：外 引物ompw-F3、外引物ompw-B3、外引物toxR-F3及外引物toxR-B3的浓 度均为20μmol/L。

6.根据权利要求2或3所述的双重LAMP检测试剂盒，其特征在于：环 引物ompw-LF、环引物ompw-LB、环引物toxR-LF及环引物toxR-LB的浓 度均为20μmol/L。

7.根据权利要求2或3所述的双重LAMP检测试剂盒，其特征在于：所 述BstDNA聚合酶的浓度为8U/μL。

8.根据权利要求2或3所述的双重LAMP检测试剂盒，其特征在于：所 述钙黄绿素的浓度为25μmol/L。

9.一种水产品中副溶血性弧菌和霍乱弧菌的双重LAMP检测方法，其特 征在于：提取样品DNA，将样品DNA作为模板放入权利要求2的双重 LAMP扩增反应液中进行LAMP扩增，反应时间60min，反应温度61℃， 反应结束后72℃灭活5min。