[发明专利]一种过表达CADM1的骨肉瘤U-2os-CADM1细胞株及其构建方法在审
| 申请号： | 201510924952.7 | 申请日： | 2015-12-12 |
| 公开（公告）号： | CN105368785A | 公开（公告）日： | 2016-03-02 |
| 发明（设计）人： | 梁伟国;何凯元;戴丽冰;姚依村;叶冬平 | 申请（专利权）人： | 梁伟国 |
| 主分类号： | C12N5/10 | 分类号： | C12N5/10;C12N15/867 |
| 代理公司： | 广州广信知识产权代理有限公司 44261 | 代理人： | 李玉峰 |
| 地址： | 510220 广东省广州市*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 表达 cadm1 骨肉 os 细胞株 及其 构建 方法 | ||
1.一种过表达CADM1的骨肉瘤U-2os-CADM1细胞株，其特征在于：所述细胞含有过表达的CADM1，所述细胞是骨肉瘤细胞U-2os，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCCNO：C201518。
2.权利要求1所述过表达CADM1的骨肉瘤U-2os-CADM1细胞株的构建方法，其特征在于：通过构建含目的基因CADM1质粒，经慢病毒包装后转染骨肉瘤U-2os细胞，然后用嘌呤霉素筛选稳定转染细胞株而构建得到过表达CADM1的骨肉瘤U-2os-CADM1细胞株。
3.根据权利要求2所述的过表达CADM1的骨肉瘤U-2os-CADM1细胞株的构建方法，其特征在于包括以下步骤：
(1)构建含目的基因CADM1质粒
通过PCR获得目的基因CADM1的片段，PCR采用的引物为：
上游引物：5’-ATGGCGAGTGTAGTGCTGCCG-3’(序列1)
下游引物：5’-GAAAGAGTACTTCATCTAG-3’(序列2)；
PCR产物经纯化后作为外源DNA片段与包含ORF序列的质粒载体连接，经转化、筛选，通过PCR重组克隆，构建得到CADM1质粒；
(2)慢病毒包装
获得目的基因慢病毒LP-S0406-Lv201-400；
(3)转染和筛选
以目的基因慢病毒LP-S0406-Lv201-400转染骨肉瘤U-2os细胞，再用嘌呤霉素浓度2μg/ml筛选稳定转染细胞株，得到过表达CADM1的骨肉瘤U-2os-CADM1细胞株。
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