[发明专利]采用兼并引物复合扩增21个短串联重复序列的试剂盒

权利要求书

1.一种同时分析多个STR基因座的复合扩增系统，其特征在于：

在一个复合扩增反应体系中同时扩增21个基因座：Amelogenin、vWA、D21S11、D18S51、D5S818、D7S820、D13S317、D16S539、FGA、D2S1338、D19S433、D6S1043、D12S391、D8S1179、D3S1358、D1S1656、CSF1PO、PentaD、PentaE、TH01和TPOX；

所述的基因座分为下述四组，每组分别由不同荧光素标记：

第一组为D19S433、TH01、D21S11、D18S51和PentaE；

第二组为D3S1358、D13S317、D7S820、D5S818、CSF1PO和PentaD；

第三组为Amelogenin、vWA、D8S1179、TPOX、D6S1043和D1S1656；

第四组为D16S539、D12S391、D2S1338、FGA；

针对上述分组在基因座重复序列的侧翼分别设计特异性引物所述，使得基因座组内各个片段峰值均衡性达到40％以上，引物分为如下组合：

引物第一组为SEQIDNO：1-10；

引物第二组为SEQIDNO：11-22；

引物第三组为SEQIDNO：23-34；

引物第四组为SEQIDNO：35-42；

将上述四组基因座复合扩增，根据产物峰高情况调整各基因座引物浓度，使各基因座峰值整体均衡性达到30％以上。

2.根据权利要求1所述的复合扩增系统，其特征在于，其中基因座被位于该基因座两侧的一对引物扩增，其中每对引物中有一个引物的5’端进行荧光素标记。

3.根据权利要求1所述的复合扩增系统，其特征在于，该复合扩增系统的每个25ul扩增体系包括5ul上述引物混合物、10ul反应缓冲液和2U～4U的热启动TaqDNA聚合酶。

4.根据权利要求1所述的复合扩增系统，其特征在于，采用以下程序进行：

1)制作模板DNA；

2)聚合酶链式反应(PCR)扩增，

每25ul扩增体系配成混合液，混匀后分装至PCR反应管中，将2.5ul模板DNA加入PCR反应管中；

按照下面的反应条件设置热循环仪，将PCR反应管放入热循环仪中开始扩增基因片段，95℃保温5分钟；94℃保温30秒钟，60℃保温40秒钟，70℃保温50秒钟，运行30个循环；60℃保温30分钟；4℃持续保温直至取出样品；

3)电泳、检测

取0.5ul分子量内标和10ul去离子甲酰胺，乘以样品数，配成混合液；

以每管10ul混合液加入1ul扩增产物和等位基因阶梯，离心将液体收集到离心管的底部；

样品95℃变性4分钟，然后迅速冰上冷却4分钟，使DNA完全变性并保持变性状态；

将样品放在基因分析仪中开始电泳检测；

电泳结束，分析实验数据得到图谱和基因分型结果。

5.一种如权利要求1所述的复合扩增系统的对应基因座分组的SEQIDNO：1-42所示的用于复合扩增体系的引物序列或所述引物序列的混合物。

6.一种应用权利要求1所述复合扩增系统的21个短串联重复序列的复合扩增试剂盒，所述基因座为Amelogenin、vWA、D21S11、D18S51、D5S818、D7S820、D13S317、D16S539、FGA、D2S1338、D19S433、D6S1043、D12S391、D8S1179、D3S1358、D1S1656、CSF1PO、PentaD、PentaE、TH01、TPOX。该试剂盒包含SEQIDNO：1-42所示的引物。