[发明专利]采用兼并引物复合扩增21个短串联重复序列的试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，涉及检测人类基因组中具有多态性的遗传标记基因。本发明涉及用聚合酶链式反应在一个扩增体系中同时扩增多个短串联重复基因座。运用兼并引物的方法改进和提高引物序列在人类单核苷酸多态性(SNP)位点的扩增效率，有效避免由于SNP引起的座位丢失或分型错误的现象。

背景技术

短串联重复序列(简称STR)也称为微卫星或简单序列重复(SSR)，是一类广泛存在于真核生物基因组中的DNA串联重复序列，核心序列为2-6个碱基重复单位。STR基因座数量大，分部广泛，约占整个基因组的3％(InternationalHumanGenomeSequencingConsortium，2001)，而且多态性高，其多态性主要源自核心序列重复次数在个体间的差异，并且这种差异在遗传过程中遵循孟德尔遗传规律。因此，STR扩增检测技术被广泛用于个体识别、亲缘鉴定和群体遗传学研究。

目前STR复合扩增技术为法医个体识别和亲子鉴定的主要技术手段，在世界各地的DNA实验室得到广泛应用(《ForensicDNATyping》secondedition，JohnButler)。在案件分析中得到广泛应用，为案件侦破提供有力证据。随着发展，很多国家利用这一技术建立犯罪分子及嫌疑人的DNA数据库，也就是对在押犯人和犯罪嫌疑人的DNA数据分析并录入到数据库中，便于进行比对和排查等工作。

早期的STR复合扩增技术能够实现在一个反应体系中扩增10个左右的STR基因座，随着应用的广泛和数据比对的增加，10个基因座提供的信息不能满足要求，国内外的厂家开发出新的更多基因座的产品，比如美国ABI公司的AmpFlSTRIdentifiler试剂盒和美国Promega公司的16试剂盒都是15个STR基因座加性别决定基因。国内也有类似的产品，比如公安部二所的DNATyper15能够同时实现15个基因座扩增(DNATyper15基因座的研究与选择，叶健等，《刑事技术》，2007年03)。

但是，近年来随着DNA作为鉴定手段的应用越来越广，用户对试剂盒的基因座数量、信息含量和扩增时间有了更高的要求。在DNA数据库建设方面，对于试剂盒兼容性也提出了新的要求。我国的目前DNA数据库中有200万份左右，我国将在DNA数据库建设方面进一步加速，到2013年DNA数据库中的数据将超过1000万份，英国等发达国家的数据库中约有占总人口10％的数据(http://www.forensic.gov.uk,Asplen,2004)。随着我国DNA数据库建设规模将不断扩大，数据比对的作用越来越重要。数据比对是建立在STR复合扩增分析得到的数据基础之上，需要各个STR试剂盒在基因座位上具有兼容性(中国法庭科学DNA数据库，《中国法医学杂志》，姜先华，2006年第12卷第5期)。