[发明专利]一种莲瓣兰的组织培养方法及其应用

权利要求书

1.一种莲瓣兰的组织培养方法，其特征在于包括如下步骤：

(1)将莲瓣兰无菌苗茎尖为外植体，采用增殖培养基诱导根状茎增殖和丛生芽分化，培养条件如下：以LED作为组织培养光源，蓝光440～480nm，光强20～40μmo1·m^-2·s^-1，光周期12～16h/d培养40～80天；增殖培养基的组成为：1/2MS培养基、6-BA1.5～3.5mg/L、NAA0.1～0.3mg/L、蔗糖10～30g/L、活性炭0.5～1g/L、琼脂6～8g/L，pH＝5.6～5.8；

(2)将步骤(1)得到的根状茎移至继代生长培养基，诱导丛生芽生长和快速成苗，培养条件如下：以LED作为组织培养光源，红光620～660nm，光强20～40μmo1·m^-2·s^-1，光周期12～16h/d培养30～60天；继代生长培养基的组成为：1/2MS培养基、6-BA0.1～1.0mg/L、NAA0.1～0.3mg/L、蔗糖10～30g/L、活性炭0.5～1g/L、琼脂6～8g/L，pH＝5.6～5.8；

(3)将新生成苗接至生根培养基进行壮苗生根培养，培养条件如下：以LED作为组织培养光源，波长为620～660nm红光和波长为440～480nm的蓝光按比例2～4：6～8配比，光强30～60μmo1·m^-2·s^-1，光周期12～16h/d培养30～60天；生根培养基的组成为：1/2MS培养基、6-BA0.1～0.3mg/L、NAA0.2～0.5mg/L、蔗糖10～30g/L、活性炭0.5～1g/L、琼脂6～8g/L，pH＝5.6～5.8。

2.根据权利要求1所述莲瓣兰的组织培养方法，其特征在于：步骤(1)～(3)所述的培养是在20～30℃、相对湿度为40～60％条件下进行。

3.根据权利要求1所述莲瓣兰的组织培养方法，其特征在于：

所述的蓝光为波长是450～480nm的蓝光；

所述的红光为波长是630nm的红光。

4.根据权利要求1所述莲瓣兰的组织培养方法，其特征在于：步骤(1)中所述的增殖培养基的组成为：1/2MS培养基、6-BA2.5mg/L、NAA0.3mg/L、蔗糖15g/L、活性炭0.5g/L、琼脂6～8g/L，pH＝5.6～5.8。

5.根据权利要求1所述莲瓣兰的组织培养方法，其特征在于：步骤(1)中所述的培养条件为：以LED作为组织培养光源，蓝光450～480nm，光强20μmo1·m^-2·s^-1，光周期16h/d培养60天，环境温度为24士1℃。

6.根据权利要求1所述莲瓣兰的组织培养方法，其特征在于：步骤(2)中所述的继代生长培养基的组成为：1/2MS培养基、6-BA0.5mg/L、NAA0.2mg/L、蔗糖20g/L、活性炭0.5g/L、琼脂6～8g/L，pH＝5.6～5.8。

7.根据权利要求1所述莲瓣兰的组织培养方法，其特征在于：步骤(2)中所述的培养条件为：以LED作为组织培养光源，红光630nm，光强20μmo1·m^-2·s^-1，光周期16h/d培养60天，环境温度为24士1℃，相对湿度50-60％。

8.根据权利要求1所述莲瓣兰的组织培养方法，其特征在于：步骤(3)中所述的生根培养基的组成为：1/2MS培养基、6-BA0.2mg/L、NAA0.5mg/L、蔗糖20g/L、活性炭0.5g/L、琼脂6～8g/L，pH＝5.6～5.8。

9.根据权利要求1所述莲瓣兰的组织培养方法，其特征在于：步骤(3)中所述的培养条件为：以LED作为组织培养光源，波长为630nm的红光和波长为450～480nm的蓝光按比例2：6配比，光强40μmo1·m^-2·s^-1，光周期16h/d培养60天，环境温度为24士1℃，相对湿度50-60％。

10.权利要求1～9任一项所述莲瓣兰的组织培养方法在规模化培育莲瓣兰中的应用。