[发明专利]一种莲瓣兰的组织培养方法及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及植物组织快繁技术领域，特别涉及一种莲瓣兰的组织培养方法及其应用。

背景技术

莲瓣兰是中国地生兰属中的一大类群，主产云南。因其植株形态优美、花形多变、花色丰富、市场价格居高等原因，致使莲瓣兰野生资源遭到毁灭式的采挖，造成资源濒危。因此，对于莲瓣兰组织培养和快繁技术的研究显得尤为重要。然而，兰科植物固有的生长周期长，分化效率低，根系质量不佳等问题一直阻碍莲瓣兰的工厂化育苗和产业发展。

光质是影响植物生长发育的一个重要因子。近年有研究表明，不同的光质在植物生长的不同时期可以起到促进作用。其中发光二极管(light-emittingdiodes，LED)是近年发展起来的优质光源，它能发出精准波谱的单色光，波长范围较窄，幅度不超过20nm，又能通过调控装置而控制光强。因此光质和光照强度可调的LED光源比通常使用的植物组织培养用荧光灯，更能有效地促进试管苗的光合作用，在组织培养中具有广泛应用前景。

目前关于LED应用于植物组织培养的研究较多，但都集中于快繁体系相对成熟的物种，而对于莲瓣兰组织培养中的应用还未见有成熟的应用技术。

发明内容

本发明的首要目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供一种莲瓣兰的组织培养方法。

本发明的另一目的在于提供所述莲瓣兰的组织培养方法的应用。

本发明的目的通过下述技术方案实现：一种莲瓣兰的组织培养方法，包括如下步骤：

(1)将莲瓣兰无菌苗茎尖为外植体，采用增殖培养基诱导根状茎增殖和丛生芽分化，培养条件如下：以LED作为组织培养光源，蓝光440～480nm，光强20～40μmo1·m^-2·s^-1，光周期12～16h/d培养40～80天；增殖培养基的组成为：1/2MS培养基、6-苄基嘌呤(6-BA)1.5～3.5mg/L、萘乙酸(NAA)0.1～0.3mg/L、蔗糖10～30g/L、活性炭0.5～1g/L、琼脂6～8g/L，pH＝5.6～5.8；

(2)将步骤(1)得到的根状茎移至继代生长培养基，诱导丛生芽生长和快速成苗，培养条件如下：以LED作为组织培养光源，红光620～660nm，光强20～40μmo1·m^-2·s^-1，光周期12～16h/d培养30～60天，提高植物生长速度；继代生长培养基的组成为：1/2MS培养基、6-BA0.1～1.0mg/L、NAA0.1～0.3mg/L、蔗糖10～30g/L、活性炭0.5～1g/L、琼脂6～8g/L，pH＝5.6～5.8；

(3)将新生成苗接至生根培养基进行壮苗生根培养，培养条件如下：以LED作为组织培养光源，红光(620～660nm)和蓝光(440～480nm)按比例2～4：6～8配比，光强30～60μmo1·m^-2·s^-1，光周期12～16h/d培养30～60天，促进根的生长伸长；生根培养基的组成为：1/2MS培养基、6-BA0.1～0.3mg/L、NAA0.2～0.5mg/L、蔗糖10～30g/L、活性炭0.5～1g/L、琼脂6～8g/L，pH＝5.6～5.8。

上述培养可在20～30℃、相对湿度为40～60％条件下进行。

所述的蓝光优选为波长是450～480nm的蓝光。

所述的红光优选为波长是630nm的红光。

步骤(1)中所述的增殖培养基优选为1/2MS培养基+6-BA2.5mg/L+NAA0.3mg/L+蔗糖15g/L+活性炭0.5g/L+琼脂6～8g/L的固体培养基(pH＝5.6～5.8)。

步骤(1)中所述的培养条件优选为：以LED作为组织培养光源，蓝光450～480nm，光强20μmo1·m^-2·s^-1，光周期16h/d培养60天，环境温度为24士1℃。

步骤(2)中所述的继代生长培养基优选为1/2MS培养基+6-BA0.5mg/L+NAA0.2mg/L+蔗糖20g/L+活性炭0.5g/L+琼脂6～8g/L的固体培养基(pH＝5.6～5.8)。

步骤(2)中所述的培养条件优选为：以LED作为组织培养光源，红光630nm，光强20μmo1·m^-2·s^-1，光周期16h/d培养60天，环境温度为24士1℃，相对湿度50-60％。

步骤(3)中所述的新生成苗优选为新生芽长至2cm的新生成苗。