[发明专利]一种纳米羟基磷灰石-siRNA复合物及其制备方法

权利要求书

1.纳米羟基磷灰石-siRNA复合物，其特征在于所述复合物是由纳米羟基磷灰石和siRNA组成，所述纳米羟基磷灰石为球形，分散性良好，直径为20～50 nm；纳米羟基磷灰石表层由聚乙烯亚胺覆盖，Zeta电位为+13.22±0.5 mV；所述的siRNA的靶向基因为ras癌基因家族、sis癌基因家族、myc癌基因家族中的一种；

其制备方法包括以下步骤：

1）在15～35 ℃的反应温度下，将等体积磷酸盐溶液滴加到钙盐溶液中，以200～400rpm的速度均匀搅拌，利用浓氨水调节pH至10～13，滴加完成后持续搅拌0.5～2 h；

2）在上述反应体系中缓慢滴加聚乙二醇溶液，其滴加量为钙盐体积的0.005～0.01倍，滴加完成后持续搅拌3～6 h，搅拌速度为200～400 rpm，维持反应体系的pH=10～13；

3）在上述反应体系中缓慢滴加聚乙烯亚胺溶液，其滴加量为钙盐体积的0.005～0.01倍，滴加完成后持续搅拌2～12 h，搅拌速度为200～400 rpm，维持反应体系的pH=10～13；

4）反应完成后，8000～15000 rpm离心3～5 min，分离沉淀，将沉淀分别用去离子水、无水乙醇超声清洗3次，然后将清洗后样品置于37 ℃～70 ℃烘箱干燥，得到羟基磷灰石纳米颗粒；

5）将步骤4）得到的羟基磷灰石纳米颗粒紫外灭菌0～24 h后以DEPC水重悬、超声，得到羟基磷灰石悬液；

6）将步骤5）得到的羟基磷灰石悬液与siRNA按质量比1: 1～20: 1进行混合并吹打，20℃静置5～30 min，即得到纳米羟基磷灰石-siRNA复合物。

2.根据权利要求1所述的纳米羟基磷灰石-siRNA复合物，其特征在于所述羟基磷灰石表层聚乙烯亚胺分子量为8～120 kDa。

3.根据权利要求1所述的纳米羟基磷灰石-siRNA复合物，其特征在于所述的siRNA用FAM、Cy3、Cy5荧光染料中的一种标记。

4.根据权利要求1所述的一种纳米羟基磷灰石-siRNA复合物，其特征在于步骤1）中的钙盐溶液为Ca(NO₃)₂、CaCl₂水溶液，终浓度为1～10 mmol/L，磷酸盐溶液为Na₂HPO₄、NaH₂PO₄、(NH₄)₂HPO₄水溶液，终浓度为1～5 mmol/L。

5.根据权利要求1所述的一种纳米羟基磷灰石-siRNA复合物，其特征在于步骤2）中的聚乙二醇为PEG-400。

6.根据权利要求1所述的一种纳米羟基磷灰石-siRNA复合物，其特征在于步骤3）中加入的聚乙烯亚胺溶液浓度为1～100 mg/mL。