[发明专利]一种防治鸡球虫病的CHP317基因、疫苗及其制备方法

权利要求书

1.一种制备预防鸡球虫病的疫苗或药物的方法，所述方法为：

将测序正确的重组克隆质粒pGEM-T-Et CHP317，利用限制性内切酶BamH I和Xho I进行双酶切，然后再与用同样限制性内切酶双酶切的原核表达载体pET-28a连接，构建重组表达质粒pET-Et CHP317；将构建成功的pET-Et CHP317重组表达质粒，转化大肠杆菌BL21(DE3)，接种于至含5％(质量比)葡萄糖和0.2％(质量比)谷胺酰胺的LB培养基中，37℃，180rpm振荡培养至细胞密度为10⁹cfu/ml，取20mL IPTG诱导上述菌液，4℃离心获得菌体沉淀后，加入适量PBS缓冲液，悬浮均匀，离心；

或者为，将鉴定正确的重组质粒pGEM-T-Et CHP317和真核表达载体pcDNA3.1-flag分别用BamH I和Hind 3进行双酶切，电泳后将Et CHP317目的条带和酶切的pcDNA3.1-flag载体分别进行胶回收，然后4℃连接过夜，将连接产物转化到大肠杆菌Top10感受态细胞中，构建重组表达质粒pcDNA3.1-flag-Et CHP 317；将构建成功的pcDNA3.1-flag-Et CHP 317重组表达质粒，转化毕赤酵母细胞，接种于至含5％(质量比)葡萄糖和0.2％(质量比)谷胺酰胺的YPD培养基中，37℃，180rpm振荡培养至细胞密度为10⁹cfu/ml，4℃离心获得菌体沉淀后，加入适量PBS缓冲液，悬浮均匀，离心；

其中，Et CHP317基因的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.如权利要求1所述的制备方法，将离心后的沉淀用玉米淀粉吸附，具体为：每克玉米淀粉吸附10¹⁰cfu细胞；得菌粉；

将25重量份的沸石粉与75重量份的玉米淀粉相混合，该沸石粉和玉米淀粉均能过100目筛；得载体；

将菌粉与上述载体按1∶9的重量比进行混合，简单加以搅拌混合即得防治鸡球虫病的口服生物制剂；每克该口服生物制剂含有10⁹cfu的疫苗或药物。

3.一种利用权利要求1或2所述的方法制备获得的用于制备预防鸡球虫病的疫苗或药物。