[发明专利]β-胡萝卜素高产菌株的筛选方法

权利要求书

1.一种β-胡萝卜素高产菌株的筛选方法，其特征在于：在PDA培养基中添加三孢酸，生成 筛选培养基；将三孢布拉氏霉的菌株制备为孢子悬液，并对孢子悬液进行紫外诱变；将诱变 后的孢子于筛选培养基中培养并形成菌落，挑取颜色深于出发菌株的菌落即为目的菌落。

2.根据权利要求1所述的β-胡萝卜素高产菌株的筛选方法，其特征在于：按筛选培养基 质量的0.05%向筛选培养基中加入OP乳化剂。

3.根据权利要求1或2所述的β-胡萝卜素高产菌株的筛选方法，其特征在于：PDA培养基 内加入的三孢酸为三孢酸粗提物溶液，其制备过程为：将三孢布拉霉出发菌株的正负菌株 按1:4比例混合，在发酵培养基中发酵6天，得到发酵液；取100ML发酵液并用稀盐酸调至 pH2.0，然后7000r/min，离心10min后，留取上清溶液；在上述上清溶液中，加入等体积氯仿， 震荡萃取，分液，保留氯仿层；向氯仿层中加入相同体积的4%NaHCO₃溶液萃取，留取NaHCO₃层；再将上述溶液的pH用稀盐酸调至2.0，加入相同体积氯仿，充分震荡，萃取；将氯仿层旋 转蒸干，得到三孢酸粗提物；三孢酸粗提物溶于100ML蒸馏水中，-20℃保藏。

4.根据权利要求3所述的β-胡萝卜素高产菌株的筛选方法，其特征在于：发酵培养基中 按质量百分比包括以下组分：玉米淀粉3.0%，黄豆饼粉2.0%，KH₂PO₄0.25%，MgSO₄.7H₂O 0.02%,，豆油3.0%，工业玉米浆2.0%，VB₁0.005%，柠檬酸三钠0.3%，曲拉通1000.1%，2, 6-二叔丁基-4-甲基苯酚0.05%；pH值自然。

5.根据权利要求4所述的β-胡萝卜素高产菌株的筛选方法，其特征在于：按PDA培养基质 量的1%向PDA培养基内添加三孢酸粗提物溶液。

6.根据权利要求5所述的β-胡萝卜素高产菌株的筛选方法，其特征在于：按PDA培养基质 量的2%向筛选培养基中添加琼脂粉，并于121℃灭菌20min。

7.根据权利要求6所述的β-胡萝卜素高产菌株的筛选方法，其特征在于：PDA培养基的制 备方法为，将土豆去皮，切成丁状，称取200g加入适量水中，煮沸20min，用8层滤布过滤取清 液，定容至1L，加入20g葡萄糖，琼脂粉20g，加热融化后，分装至试管中，每只试管装液6- 8mL，121℃灭菌20min后，即得PDA培养基。

8.根据权利要求1或7所述的β-胡萝卜素高产菌株的筛选方法，其特征在于：将保藏的三 孢布拉霉正负菌株取出，挑取少量菌体，涂于PDA培养中，27℃培养6-8天，待孢子成熟后，保 藏于4℃；将正负菌孢子用无菌生理盐水洗下，用血球计数板计数后，稀释至106个/mL；正负 菌株按照1:4的比例，相对发酵培养基体积10%的比例接种于100mL发酵培养基中，27℃， 220r/min，6天，获得菌体及发酵液；制备孢子液，取5mL孢子液于放有转子的平板中，将平板 置于磁力搅拌器上，转动中紫外照射4min，取0.1mL的处理后孢子液涂布于筛选培养基上， 生长2-4天，挑取目的菌落。