[发明专利]一种猪传染性胃肠炎病毒逆转录环介导等温扩增试剂盒及其应用在审

申请号：	201510942772.1	申请日：	2015-12-16
公开（公告）号：	CN105385789A	公开（公告）日：	2016-03-09
发明（设计）人：	陈忠伟;张宁;何颖;秦毅斌;卢冰霞;郭旋;赵武;刘磊;李斌;段群棚;周英宁;梁家幸;杨思仪;蒋冬福;苏乾莲	申请（专利权）人：	广西壮族自治区兽医研究所;广西农垦永新畜牧集团金光有限公司
主分类号：	C12Q1/70	分类号：	C12Q1/70;C12Q1/68;C12R1/93
代理公司：	广州市红荔专利代理有限公司 44214	代理人：	李彦孚;何承鑫
地址：	530000 广西壮族***	国省代码：	广西;45
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摘要：
搜索关键词：	种猪传染性胃肠炎病毒逆转录环介导等温扩增试剂盒及其应用
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【权利要求书】：

1.一种猪传染性胃肠炎病毒逆转录环介导等温扩增试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括RT-LAMP引物、2×反应缓冲液、EM、荧光目视检测试剂、超纯水和猪传染性胃肠炎病毒RNA模板；所述的RT-LAMP引物包括外引物F3（SEQIDNO：1）与B3（SEQIDNO：2）、内引物FIP（SEQIDNO：3）与BIP（SEQIDNO：4）和环引物LF（SEQIDNO：5）与LB（SEQIDNO：6）；

其中：

F3TCAACAGATTGGTTATTGGAAT

B3ATTAGCACCACGACTACC

FIPAGTAGAAGAACCACCTTTCAGGAAGGACAAACTCGCTATCGCA

BIPGTACTGGACCTCATGCAGATGCTTGTTCATGGCACCATCC

LFCTCTTTACGTTGGCCCTTCAC

LBGATGGAGTTGTCTGGGTTGC

所述的2×反应缓冲液是Tris-HCL、KCL、MgSO₄、(NH₄)₂SO₄、Tween20、Betaine和dNTPs。

2.根据权利要求1所述的猪传染性胃肠炎病毒逆转录环介导等温扩增试剂盒，其特征在于，所述的猪传染性胃肠炎病毒RNA模板是使用病毒基因组DNA/RNA提取试剂盒提取，自猪病变组织样品或粪便中提取的猪传染性胃肠炎病毒的RNA。

3.根据权利要求1所述的猪传染性胃肠炎病毒逆转录环介导等温扩增试剂盒，其特征在于，所述的荧光目视检测试剂采用钙黄绿素荧光试剂，荧光试剂在反应前加入。

4.根据权利要求1所述的猪传染性胃肠炎病毒逆转录环介导等温扩增试剂盒，其特征在于，所述的2×反应缓冲液包括Tris-HCL35-55mM、KCL15-35mM、MgSO₄15-20mM、(NH₄)₂SO₄15-25mM、Tween200.4-0.8%、Betaine1.5-3.0M和dNTPs2.5-4mM。

5.一种猪传染性胃肠炎病毒逆转录环介导等温扩增试剂盒的应用，其特征在于，用于兽医临床上检测疑似猪传染性胃肠炎病变组织或猪粪便排泄物等是否含有猪传染性胃肠炎病毒，具体检测步骤包括：

（1）RT-LAMP引物的设计与合成

（2）猪传染性胃肠炎病毒RNA模板的提取

（3）RT-LAMP反应体系的建立

（4）RT-LAMP检测方法。

6.根据权利要求5所述的猪传染性胃肠炎病毒逆转录环介导等温扩增试剂盒的应用，其特征在于，所述的RT-LAMP反应体系建立以25μl计，

2×反应缓冲液12.5μL

EM1μL

FIP40pmol

BIP40pmol

LF20pmol

LB20pmol