[发明专利]一种BRAF V600E基因的检测引物组、其构成的反应体系及应用

权利要求书

1.一种BRAFV600E基因的检测引物组，其特征在于，所述检测引物组如下：

正向外侧引物F3：SEQIDNO:1；

反向外侧引物B3：SEQIDNO:2；

正向内侧引物FIP：SEQIDNO:3；

反向内侧引物BIP：SEQIDNO:4。

2.根据权利要求1所述的检测引物组，其特征在于，所述SEQIDNO:3所示的序列是用 于检测BRAFV600E突变的特异性引物。

3.一种检测BRAF基因的反应体系，其特征在于，所述反应体系包括权利要求1或2所述 的引物组，反应缓冲液，dNTPs，羟基萘酚蓝，甜菜碱，BstDNA聚合酶，待检样品基因组DNA和 去离子水。

4.根据权利要求3所述的反应体系，其特征在于，所述反应缓冲液包括Tris-HCl，KCl， (NH₄)₂SO₄，MgSO₄和Tween-20；

优选地，所述Tris-HCl的浓度为10-30mM，优选为15-25mM，进一步优选为20mM；

优选地，所述KCl的浓度为10-60mM，优选为50-55mM，进一步优选为50mM；

优选地，所述(NH₄)₂SO₄的浓度为5-13mM，优选为8-12mM，进一步优选为10mM；

优选地，所述MgSO₄的浓度为2-8mM，优选为2-6mM，进一步优选为4mM；

优选地，所述Tween-20的体积分数为0.1-1％，优选为0.1％。

5.根据权利要求3或4所述的反应体系，其特征在于，所述dNTPs的浓度为1-2mM，优选为 1.2-1.8mM，进一步优选为1.4mM；

优选地，所述羟基萘酚蓝的浓度为108-130μM，优选为115-123μM，进一步优选为120μM；

优选地，所述甜菜碱的浓度为0.1-1.2M，优选为0.5-1M，进一步优选为1M。

6.根据权利要求3-5中任一项所述的反应体系，其特征在于，所述反应体系中每25μL反 应体系含有以下组分：

缓冲液：

7.一种如根据权利要求3-6中任一项所述的反应体系的使用方法，其特征在于，所述方 法包括如下步骤：

将反应体系所需各组分混合完毕，放置于恒温水浴锅进行反应，反应后升温进行灭活 处理，再根据体系颜色变化判定结果。

8.根据权利要求7所述的使用方法，其特征在于，所述恒温水浴锅的温度为55-70℃，优 选为60-68℃，进一步优选为63℃；

优选地，所述反应时间为15-90min，优选为45-80min，进一步优选为60min；

优选地，所述升温后的温度为78-90℃，优选为80-85℃，进一步优选为80℃；

优选地，所述升温后的反应时间为15-30min，优选为18-26min，进一步优选为20min。

9.根据权利要求7或8所述的使用方法，其特征在于，所述根据体系颜色变化判定结果 为：

反应体系为紫罗兰，则待测样本不携带BRAFV600E突变；

反应体系为天蓝色，则待测样本携带BRAFV600E突变。

10.一种检测BRAF基因的检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含如权利要求3所述 的反应体系。