[发明专利]检测食管癌的生物标志物

说明书

技术领域

本发明涉及肿瘤标志物领域，涉及用于食管癌早期诊断的生物标志物，具体地，本 发明提供了可通过质谱检测的特征多肽组合作为食管癌早期诊断的生物标志物。

背景技术

食管癌是在全世界范围内的第八大最常见的癌症，按照与癌症有关的致死原因排 序，食管癌排在第六位。尽管目前各国医疗科研机构对食管癌的诊断、治疗的研究都有所进 展，但它的五年生存率平均只有15％，仍然缺乏可靠的诊断方法、早期检测方法和有效的个 体化治疗方案，并且预后效果差。据研究报导，处于早期阶段的肿瘤，如果切除成功，会使食 管鳞状细胞癌患者的5年总生存率超过90％，表明早期诊断和治疗可降低病死率。目前用于 识别食管癌患者的生物标志物，在癌症早期阶段还缺乏足够的灵敏度和特异性。

目前食管癌的检测仍然停留在临床表征检测水平，缺乏早期预警的技术手段。近 年来也出现了一些新型质谱检测技术，如：中国专利申请200510075367、“一种在食管癌病 人血清中检测肿瘤相关标志物的方法”公开了一种在食管癌病人血清中检测肿瘤相关标志 物的方法，包括：蛋白免疫印迹证实Ku70蛋白为食管癌特异的肿瘤相关标志物，制备该标志 物的抗体，然后利用该标记物检测病人血样，并通过SDS-PAGE电泳，分离肿瘤特异表达的蛋 白条带，进行电喷雾离子化偶联在线离子阱质谱蛋白属性鉴定，最终实现检测目的。然而该 方法涉及免疫组织化学方法、电泳分离纯化法，最终才进行质谱检测，过程耗时费力，影响 了临床检测效果。

中国专利申请201210479435、“一种食管癌免疫质谱检测试剂盒”则公开了另一 种质谱检测技术，包括：将特定单克隆抗体结合到检测载体上，吸附样品中的待分析物，然 后收集待分析物进行质谱检测。该方法仍然属于传统的免疫吸附分离联合质谱检测技术， 由于前期的分离过程过于传统和复杂，涉及制备特定单抗和抗体/抗原的孵化结合等过程， 无法实现食管癌的早期、快速准确诊断和微量检测的技术效果。

基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MatrixAssistedLaserDesorption IonizationTimeofFlightMassSpectrometry，MALDI-TOF-MS)是近年来发展起来的一 种新型的软电离生物质谱，其原理是用激光照射样品与基质形成的共结晶薄膜，基质从激 光中吸收能量传递给生物分子，而电离过程中将质子转移到生物分子或从生物分子得到质 子，从而使生物分子电离的过程。TOF的原理是离子在电场作用下加速飞过真空飞行管道， 根据到达检测器的飞行时间不同来检测离子，即被检测离子的质荷比(m/z)与该离子的飞 行时间成正比。尽管MALDI-TOF的准确度高达0.1％～0.01％，远远高于目前常规应用的十 二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)与高效液相色谱技术，但迄今为止尚无采用 MALDI-TOF-MS技术获得检测食管癌标志物或食管癌血清特征多肽的报道。

发明内容

本发明的发明人基于质谱检测技术，令人惊奇地发现了可用于食管癌诊断的生物 标志物，该生物标志物可灵敏、准确地诊断食管癌或评估罹患食管癌的风险，由此完成了本 发明。

本发明第一方面涉及生物标志物或生物标志物组合，其包括选自质荷比为1925.5 ±3.0m/z(例如±2.0m/z、±1.0m/z、±0.2m/z)、2950.6±3.0m/z(例如±2.0m/z、±1.0m/ z、±0.3m/z)、5900.0±3.0m/z(例如±2.0m/z、±1.0m/z、±0.6m/z)的多肽中的一种、两种 或三种，优选地，

所述质荷比为1925.5±3.0m/z的多肽具有如下所示的序列：Met-Gly-Val-Val- Ser-Leu-Gly-Ser-Pro-Ser-Gly-Glu-Val-Ser-His-Pro-Arg-Lys-Thr(SEQIDNO:1)；

所述质荷比为2950.6±3.0m/z的多肽具有如下所示的序列：Asn-Arg-Ile-Pro- Glu-Ser-Gly-Gly-Asp-Asn-Ser-Val-Phe-Asp-Ile-Phe-Glu-Leu-Thr-Gly-Ala-Ala-Arg- Lys-Gly-Ser-Gly-Arg(SEQIDNO:2)；