[发明专利]一种检测FOXH1基因SNP位点rs750472基因型的方法

权利要求书

1.一种检测FOXH1基因SNP位点rs750472基因型的方法，其特征在于：步骤如下：

（1）构建重组阴性质粒和重组阳性质粒；所述重组阴性质粒的核苷酸序列参见序列表中SEQIDNo.1，所述重组阳性质粒的核苷酸序列参见序列表中SEQIDNo.2；

（2）提取待测样本的外周血基因组DNA，对重组阴性质粒、重组阳性质粒和待测样本的外周血基因组DNA均进行PCR扩增和HRM分析，收集数据；

作为优选，所述HRM分析的条件为：94℃90s；60℃30s；83-94℃收集数据，温度上升速率为0.06℃/s；

（3）根据收集数据绘制高分辨率溶解曲线，根据重组阴性质粒、重组阳性质粒的溶解曲线判断待测样本FOXH1基因SNP位点rs750472的基因型：

与重组阴性质粒的溶解曲线重合则FOXH1基因SNP位点rs750472的基因型为TT；

与重组阳性质粒的溶解曲线重合则FOXH1基因SNP位点rs750472的基因型为GG；

在重组阴性质粒和重组阳性质粒的溶解曲线之间的则FOXH1基因SNP位点rs750472的基因型为TG。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述PCR扩增时所用引物为（1）或（2）中的一种：

（1）上游引物：FOXH1-F5'-ACCAGGGAAGACGGGATAAAGT-3'；

下游引物：FOXH1-R5'-TCTAGTGGGGGCTTCTCCTGA-3'；

（2）与（1）中的互补序列。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述PCR扩增时的反应体系为：

Green-2-GoqPCRMastermix（含EvaGreen）5μl

引物F（10μM）0.1μl

引物R（10μM）0.1μl

模板(50ng/μl)0.5μl

ddH₂O4.3μl

总体积10μl。

4.根据权利要求1-3任一所述的方法，其特征在于：所述PCR扩增时的反应条件为：94℃预变性3min；94℃变性10s，60℃退火/延伸20s；40个循环。

5.一种用于检测FOXH1基因SNP位点rs750472基因型的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括重组阴性质粒、重组阳性质粒和用于扩增质粒的引物；所述重组阴性质粒的核苷酸序列参见序列表中SEQIDNo.1，所述重组阳性质粒的核苷酸序列参见序列表中SEQIDNo.2。

6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于：所述引物的序列为（1）或（2）中的一种：

（1）上游引物：FOXH1-F5'-ACCAGGGAAGACGGGATAAAGT-3'；

下游引物：FOXH1-R5'-TCTAGTGGGGGCTTCTCCTGA-3'；

（2）与（1）中的互补序列。

7.根据权利要求5或6所述的试剂盒，其特征在于：所述PCR扩增时的反应体系为：

Green-2-GoqPCRMastermix（含EvaGreen）5μl

引物F（10μM）0.1μl

引物R（10μM）0.1μl

模板(50ng/μl)0.5μl

ddH₂O4.3μl

总体积10μl；

作为优选，所述扩增质粒时的PCR反应条件为：94℃预变性3min；94℃变性10s，60℃退火/延伸20s；40个循环。