[发明专利]一种鉴别榕母管蓟马和榕管蓟马的分子方法在审
| 申请号： | 201510948572.7 | 申请日： | 2015-12-17 |
| 公开（公告）号： | CN105420365A | 公开（公告）日： | 2016-03-23 |
| 发明（设计）人： | 张利娟;崔金杰;彩万志;张帅;雒珺瑜;王春义;吕丽敏;李春花;朱香镇;王丽 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院棉花研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 北京路浩知识产权代理有限公司 11002 | 代理人： | 王文君 |
| 地址： | 455000 河*** | 国省代码： | 河南;41 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 鉴别 榕母管蓟马 榕管蓟马 分子 方法 | ||
1.一种鉴别榕母管蓟马和榕管蓟马的分子方法，其特征在于，包括如下步骤：
1)提取待鉴定样品的总基因组DNA；
2)以步骤1)提取的DNA为模板，使用引物对进行PCR扩增，并纯化PCR扩增产物；
3)对步骤2)的纯化后的PCR扩增产物进行测序，依据特定位点的测序结果判断样品为榕母管蓟马还是榕管蓟马。
2.根据权利要求1所述鉴别榕母管蓟马和榕管蓟马的方法，其特征在于，所述引物对为COI基因引物对和/或ITS2分子标记引物对。
3.根据权利要求2所述鉴别榕母管蓟马和榕管蓟马的方法，其特征在于，所述COI基因引物对如下：
上游引物：5'-GGTCAACAAATCATAAAGATATTGG-3'，核苷酸序列如SEQIDNO.1所示；
下游引物：5'-TAAACTTCAGGGTGACCAAAAAATCA-3'，核苷酸序列如SEQIDNO.2所示。
4.根据权利要求3所述鉴别榕母管蓟马和榕管蓟马的方法，其特征在于，当使用COI基因引物对时，依据扩增产物的第28、78、82、88、92、97、103、151、166、172、214、235、265、271、328、337、347、355、364、370、445、457、470、472、503、525、538、610、616、619、622bp处碱基进行判断：
如上述位点的碱基依次为G、C、G/T、A、A/T、C、G、T、G、C、G、T、A、C、G、A、T、T、A、A、A、C、G、C、G、T/G、G、A、A、G、T的则为榕母管蓟马；
如上述位点的碱基依次为A、T、G、G、A、T、A、C、A、T、A、C、G、T、A、G、C、C、G、G、A、T、A、T、T、T、A、G、G、A、C的则为榕管蓟马。
5.根据权利要求2所述鉴别榕母管蓟马和榕管蓟马的方法，其特征在于，所述ITS2分子标记引物对如下：
上游引物：5'-AGACTCCTTGGTCCGTGTTTC-3'，核苷酸序列如SEQIDNO.3所示；
下游引物：5'-ATCACTCGGCTCGTGGATCG-3'，核苷酸序列如SEQIDNO.4所示。
6.根据权利要求5所述鉴别榕母管蓟马和榕管蓟马的方法，其特征在于，当使用ITS2分子标记引物对时，依据扩增产物的第54、61、135、136、179、344、348、374、376、377、378、606、633、661、662、709、790、841、906、966、978、979、1116、1144、1217、1226、1227、1228、1250、1255、1258、1259、1325、1327、1331、1332bp处碱基进行判断：
如上述位点的碱基依次为C、C、C/T、G、T、T/C、T、A、T、T、T、A、A、T、T、A/G、G/A、T、C/T、T、G、A、T、T/C、A、A、A、G、T、T、T、C、G、A/G、A、C的为榕母管蓟马；
如上述位点的碱基依次为T、C/T、T、A、T/C、C、C、C/T/A、C/T、A/T、G/T、G、G、A、A、A/G、A、A、C、T/A、T、A/C、T/C、T、G、G、A/G、C/A、C、C、C、T、A、A、G/A、C/T的为榕管蓟马。
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