[发明专利]一种水体中氯霉素CAP的定量检测方法

权利要求书

1.一种水体中氯霉素CAP的定量检测方法，其特征是包括以下步骤：

(1)将拉曼信号示踪分子和CAP-BSA结合到贵金属微粒表面，制备成免疫光谱标记处理的贵金属微粒A溶液，其中BSA为牛血清白蛋白；所述的拉曼信号示踪分子为4,4'-联吡啶；

(2)采用活化剂活化表面修饰有羧基的磁性微粒，随后加入CAP抗体，制备成修饰有CAP抗体的磁性微粒B溶液；

(3)选取CAP标准溶液，用三蒸水稀释制成一组具有浓度梯度的样品液；

(4)将步骤(1)中的A溶液和步骤(3)的一组具有浓度梯度的样品液中的每一份分别加入到步骤(2)得到的B溶液中，则样品液中的CAP和A溶液中的CAP-BSA同时与溶液B中的CAP抗体特异性结合；所述的A溶液的浓度为0.95～1.05mmol/L，其与样品液的体积比为4.5～5.5：1，所述的B溶液的浓度为0.4～0.6mg/mL，其与所述的A溶液的体积比为1：1.0～1.25；

(5)利用磁场分离磁性结合物，保留上清液，用显微拉曼光谱仪对上清液中残留的贵金属微粒上拉曼信号示踪分子进行信号采集，根据步骤(3)的样品液中CAP浓度和拉曼信号强度的对应关系，绘制标准曲线；

(6)取待测水样品，经过滤、离心除杂，并用三蒸水稀释以消除基质影响后，根据该待测水样品获得的拉曼光谱信号强度，代入步骤(5)中的标准曲线读出CAP的浓度，乘以相应的稀释倍数即为待测水样品中CAP的浓度。

2.根据权利要求1所述的水体中氯霉素CAP的定量检测方法，其特征是：步骤(1)中将拉曼信号示踪分子和CAP-BSA结合到贵金属微粒表面后，再采用BSA封闭剩余活性位点，其中剩余活性位点是指贵金属微粒表面未结合拉曼信号示踪分子和CAP-BSA的部分。

3.根据权利要求1所述的水体中氯霉素CAP的定量检测方法，其特征是：步骤(1)中所述的贵金属微粒为胶体金，其平均粒径为30～35nm。

4.根据权利要求1所述的水体中氯霉素CAP的定量检测方法，其特征是：步骤(2)中所述的活化剂为1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺。

5.根据权利要求1所述的水体中氯霉素CAP的定量检测方法，其特征是：步骤(2)中所述的表面修饰有羧基的磁性微粒为表面修饰有羧基的四氧化三铁Fe₃O₄，其粒径为400～500nm。

6.根据权利要求1所述的水体中氯霉素CAP的定量检测方法，其特征是：步骤(3)中制成一组具有浓度梯度的样品液的浓度分别为0、1、10、100、1000和10000pg/mL。

7.根据权利要求1所述的水体中氯霉素CAP的定量检测方法，其特征是：步骤(5)和步骤(6)中所述的显微拉曼光谱仪的操作参数为：激发光源是波长为632.8nm的He-Ne激光器，到达样品的激光功率为1mW，信号收集时间为10～60s。

8.根据权利要求1所述的水体中氯霉素CAP的定量检测方法，其特征是：步骤(5)中所述的拉曼信号强度是选取拉曼信号示踪分子的特征拉曼谱峰作为定量峰，并以步骤(3)的样品液中的CAP浓度对该谱峰光谱强度作图，线性拟合，并以此绘制标准曲线；步骤(6)中所述的拉曼信号强度也是选取拉曼信号示踪分子的特征拉曼谱峰作为定量峰。