[发明专利]一种水体中氯霉素CAP的定量检测方法

说明书

本发明公开了一种水体中氯霉素CAP的定量检测方法，先制备免疫光谱标记处理的贵金属微粒A溶液，再制备修饰有CAP抗体的磁性微粒B溶液，然后制备一系列浓度梯度的CAP样品液，将A溶液和一系列浓度梯度的CAP样品液滴到B溶液中，则样品液中的CAP和溶液A中的CAP‑BSA同时与溶液B中的CAP抗体特异性结合；随后利用磁场分离磁性结合物，保留上清液，采集上清液中残留的贵金属微粒上拉曼信号示踪分子的信号，根据样品液中CAP浓度和拉曼信号强度的对应关系，绘制标准曲线，从而检测待测水样品中CAP的浓度，该方法条件温和、操作简便，检测过程快速，检测结果准确，灵敏度高，可以实现对痕量氯霉素的定量分析。

技术领域

本发明属于痕量抗生素检测技术领域，具体涉及一种水体中氯霉素CAP的定量检测方法，尤其是一种通过磁性微粒实现物理分离的拉曼光谱标记探测技术定量检测水体中氯霉素CAP的方法。

背景技术

氯霉素(Chloramphenicol，CAP)是一种抑菌性广谱抗生素，且是世界上首种完全由合成方法大量制造的广谱抗生素。其对很多不同种类的微生物均起显著作用。但由于其会引起致命的再生不良性贫血这一副作用，因此目前已被国际上大部分国家禁用。但近年来常有抗生素污染事件发生，因此准确快速检测抗生素(氯霉素)具有非常重要的意义。目前，氯霉素的检测主要有色谱-质谱联用、酶联免疫等方法。色谱-质谱联用法由于操作繁琐、成本高、分析速度慢等缺点无法得到普遍推广。而酶联免疫试剂盒虽然选择性好、操作方便，但价格昂贵、贮藏条件苛刻，假阳性比较高，并且检测限较高，满足不了快速准确的检测要求。

作为一种近几年快速发展的分析检测手段，表面增强拉曼标记技术是一种非常新颖的光谱标记方法，其相对于其他检测方法的优势主要体现在：①检测条件温和、简便，可以方便的用于水溶液检测；②增强因子最高可达10¹⁴～10¹⁵，具有超高的检测灵敏度，可以实现单分子检测；③高度的分子特征性，可以在极其复杂的体系中仅仅增强表面的目标分子或基团，具有很好的选择性。

在传统的拉曼光谱免疫分析检测中，最常用的检测基底为固相基底。该种技术涉及到众多且重复的对于固相基底的清洗步骤；在固相基底上，检测物与检测试剂之间所需要的结合时间过长，效率低。同时，通过清洗的方法来去除未参与反应的残留的示踪分子，这一过程并不能保证残留物的彻底清除，对于后续的信号检测会产生干扰。

此外，早前关于拉曼光谱免疫分析的研究主要集中在蛋白质、DNA、微生物检测等方面，这些大分子物质一般具有多个结合位点，能够很好的适用于传统的三明治结构。而氯霉素是一种典型的小分子物质，缺少多个结合位点，采用拉曼免疫分析中传统的“三明治”结构难以对其实现检测。基于拉曼光谱分析技术的优点，因此，发展一种新的应用拉曼光谱标记技术简单快速检测氯霉素的方法显得十分重要。

发明内容

本发明的目的在于提供一种水体中氯霉素CAP的定量检测方法，该检测方法温和、简便，检测的灵敏度更高，检测区间广。

因此，本发明的上述目的是通过以下技术方案来实现的：一种水体中氯霉素CAP的定量检测方法，包括以下步骤：

(1)将拉曼信号示踪分子和CAP-BSA结合到贵金属微粒表面，制备成免疫光谱标记处理的贵金属微粒A溶液，其中BSA为牛血清白蛋白；

(2)采用活化剂活化表面修饰有羧基的磁性微粒，随后加入CAP抗体，制备成修饰有CAP抗体的磁性微粒B溶液；

(3)选取CAP标准溶液，用三蒸水稀释制成一组具有浓度梯度的样品液；

(4)将步骤(1)中的A溶液和步骤(3)的一组具有浓度梯度的样品液中的每一份分别加入到步骤(2)得到的B溶液中，则样品液中的CAP和A溶液中的CAP-BSA同时与溶液B中的CAP抗体特异性结合；