[发明专利]猪特异性友好位点Pifs102及其应用

说明书

本发明涉及基因工程领域，具体公开了一个猪特异性友好位点Pifs102。所述友好位点Pifs102在基因组上的位置为：第13号染色体上第98768519bp(NC_010455.4，基于猪基因组序列信息版本号Sscrofa10.2，2011年9月)。本发明提供的猪特异性友好位点Pifs102可用于外源基因的稳定表达，解决转基因过程中外源基因表达的不稳定以及位置效应的不可预知性等问题。本发明提供的猪特异性友好位点Pifs102，使得对大家畜进行定点整合外源基因变得可靠，为大家畜的定点整合奠定了基础。本发明针对猪特异性友好位点Pifs102提供的打靶载体可以高效特异的实现打靶。

技术领域

本发明涉及基因工程领域，具体地说，涉及猪特异性友好位点Pifs102。

背景技术

在转基因动物的生产过程中，外源基因能否实现在转基因动物中高效稳定的表达，是转基因技术的关键。外源基因在受体动物基因组中随机整合，会由于位置效应表达量不稳定，受到表观修饰发生转基因的沉默。为了实现外源基因的持续稳定表达，定点转基因能够解决位置效应带来的各种问题。近年来出现ZFN和TALEN技术，以及新出现的CRISPR/Cas9技术，为基因的定点整合和基因敲除提供了新的工具，提高了转基因的效率，并在多个物种中都已经获得了成功。但是，定点转基因的关键之一在于一个好的整合位点的选择，一个好的位点能够使不同类型的外源基因表达盒稳定一致的表达,对动物细胞或者动物个体没有不利影响。目前在大动物中关于安全位点的研究比较少。因此在猪中找到这种适合外源基因整合的位点是非常重要的。

基因组中的安全位点是染色体中的一个位点，整合在这个位点的转基因能够在多个组织中稳定可靠的表达，而且能够适应不同类型的转基因表达盒的表达，对内源的基因结构和表达没有不利的影响。但是,外源DNA与寄主基因组序列之间的相互作用，会影响转基因整合的可靠性和安全性。虽然目的基因的转导已经取得了巨大的进步，但是基因插入到受体基因组中什么样的位点才能使安全性和效率最高却很少被研究。

CRISPR(clustered regularly interspaced short palindromic repeats)/Cas(CRISPR-associated)系统是一种原核生物特有的针对外源性遗传物质的免疫系统，通过序列特异的RNA介导，切割降解外源性DNA，包括噬菌体和外源质粒。CRISPR/Cas系统可以作为一种具有位点特异性的基因编辑系统，其最大的特点是操作简单、成本低、作用高效。2013年，科学家首次报道CRISPR/Cas系统在细胞上应用成功，随后，在斑马鱼、果蝇、小鼠、大鼠、猪中迅速得到应用。CRISPR/Cas系统在靶位点产生双链DNA断裂(double strandbreak,DSB),细胞可通过非同源末端连接(non-homologous end joining,NHEJ)进行修复，导致基因发生移码突变，丧失功能。除此之外，该系统还能与同源重组载体、寡聚核苷酸共同作用，使靶基因发生高效的精确修饰。2014年，Scott JG等利用CRISPR/Cas介导的同源重组在斑马鱼上实现了基因的替换。Hui Yang等利用相同的策略一步获得了带有报告基因的小鼠。CRISPR/Cas系统凭借其巨大优势迅速成为基因编辑工具中的佼佼者，在基因功能研究、疾病模型、基因治疗等领域得到广泛的应用。

CRISPR/Cas9介导同源重组已在斑马鱼、原虫、小鼠、大鼠上实现基因的精确编辑，但在家畜大动物上尚未见报道。

发明内容

为了解决现有技术中存在的问题，本发明的目的是提供一种猪特异性友好位点Pifs102及其应用。

为了实现本发明目的，本发明的技术方案如下：

第一方面，本发明提供了一个猪特异性友好位点Pifs102，所述友好位点Pifs102在基因组上的位置为：第13号染色体上第98768519bp(NC_010455.4，基于猪基因组序列信息版本号Sscrofa10.2，2011年9月)。