[发明专利]三孢布拉氏霉菌代谢组的样品前处理及样本检测方法

权利要求书

1.一种三孢布拉氏霉菌代谢组的样品前处理方法，包括以下步骤：

（1）培养三孢布拉氏霉菌：

a、种子培养：将三孢布拉氏霉正负菌分别活化后转接到500mL三角瓶中，培养基装液量 100mL，培养温度为27℃，摇床转速220rpm，培养时间为48-52h；

种子培养基按质量百分比组包括：玉米淀粉3.5%、黄豆饼粉2.3%、KH2PO40.15%、 MgSO4?7H2O0.01%、工业玉米浆1%、豆油0.5%，其余为水；

b、发酵培养：将上述正负菌种子液按比例接种到发酵培养基，发酵生产β-胡萝卜素；向 发酵过程中流加混菌发酵液；

发酵培养基中按质量百分比包括：玉米淀粉3.0%、黄豆饼粉2.0%、KH₂PO₄0.25%、MgSO₄? 7H₂O0.02%、豆油3.0%、工业玉米浆2.0%、维生素B10.005%、柠檬酸三钠0.3%、曲拉通 0.1%、BHT0.05%、混菌发酵液10%，其余为水；

（2）样品制备：

分别取12h、48h、72h的样品进行代谢样品制备；

A：利用不同提取液对相同样品进行提取，提取剂为：-40℃预冷的60%v/v乙醇水、2:2: 1v/v的氯仿：乙醇：水、60%v/v沸乙醇、60%v/v冷甲醇；

B:样品衍生化

取200μL提取液加10μL的1mg/mLγ-氨基丁酸，真空冷冻干燥后，加50μL浓度为 20mg/mL的甲氧基铵盐酸盐/吡啶溶液，充分溶解样品，置于40°C水浴中，反应80min；

加80μLN-甲基-N-(三甲基硅烷)三氟乙酰胺，混合均匀，置于40°C水浴中，反应80 min；

将衍生后的样品10000r/min离心5min；取上清液100μL加入进样瓶中，并编号， 于室温放置2h。

2.一种权利要求1所述三孢布拉氏霉菌代谢组经样品前处理后的检测方法，其特征在 于：对样品进行GC-MS检测；

GC条件：AgilentHP530m×0.25mm×0.25μm毛细管柱；进样口温度：280°C；升温程序：初 始温度70°C保持2min，以5°C/min程序升温至290°C保持5min；载气：高纯氦气，恒压模式 91kPa；进样量1μL；柱后分流比10:1；

MS条件：接口温度：280°C；电离方式：EI；电离方式：电子轰击电离EI+；离子源温度： 250°C；电子轰击能量：70eV；电子电流：40μA；扫描质量范围：50-800m/z。