[发明专利]仿刺参的雌核发育诱导方法

权利要求书

1.一种仿刺参的雌核发育诱导方法，其特征在于，采用电刺激法，电刺激前先将卵子移入电刺激缓冲液中平衡 2min,调好电脉冲仪参数，用吸管吸取 1ml 卵子放入电击杯中，即可进行电刺激处理；

所述电刺激缓冲液为Zimmerman氏缓冲液，具体成分为：0.1 mmol/L Ca(C₂H₃O₂)₂H₂O，1 mmol/L K₂HPO₄，0.5 mmol/L Mg(C₂H₃O₂)₂·4H₂O，0.1 mmol/L 还原型谷胱甘肽，1% BSA，0.28 mmol/L蔗糖；

所述电脉冲仪参数为场强0.8 kv/cm，电容3 µF，2次电脉冲。

2.根据权利要求1所述的仿刺参的雌核发育诱导方法，其特征在于，所述电刺激时的卵子密度为11×10⁴个/ml。

3.根据权利要求1所述的仿刺参的雌核发育诱导方法，其特征在于，电刺激后卵子及胚胎的培养方法为：经电刺激后的卵子被放入直径 15 cm 培养皿中，用高温蒸煮的过滤海水培养，水温保持 20℃，培养密度为每个培养皿中每升约 2×10⁵个卵子；培养初期每半小时轻轻搅动海水一次，以后每 3~4h 搅动一次，以促进其孵化。

4.根据权利要求1所述的仿刺参的雌核发育诱导方法，其特征在于，电刺激处理后 2 小时统计各组的卵裂率，24 小时统计胚胎存活率；

卵裂率或雌核发育诱导率=发生卵裂和排放极体的卵数/观察总卵数×100%；

胚胎存活率=上浮的原肠胚数量/发生卵裂的总卵数×100%。