[发明专利]一种魔芋基因组含量值的快速测定方法

权利要求书

1.一种魔芋细胞核提取液，其特征在于：每1.5mL魔芋细胞核提取液的配制如下：取5.55mgKCL，3.69mgMgSO₄，1.8mgHepes，36.3μL10%TritonX-100，0.5gPVP，用蒸馏水溶解至1.5mL。

2.权利要求1所述的魔芋细胞核提取液在魔芋基因组含量测定中的应用。

3.一种魔芋基因组含量值的快速测定方法，其特征在于包括如下步骤：

（1）取魔芋幼嫩叶片，玉米白化幼嫩叶片为内参；

（2）将魔芋、玉米的幼嫩叶片混合剪碎后加到权利要求1所述的魔芋细胞核提取液中，用刀片垂直切碎后过滤除去悬浮物；

（3）过滤后的细胞悬液离心后弃上清液；

（4）离心后的沉淀用MgSO₄缓冲液重悬；每445μLMgSO₄缓冲液的配制为：取5.55mgKCL，3.69mgMgSO₄，1.8mgHepes，用蒸馏水溶解至445μL；

（5）往细胞重悬液中加入RNAse和PI染料，混匀后避光染色；

（6）染色后的细胞悬液于流式细胞仪下测定。

4.根据权利要求3所述的魔芋基因组含量值的快速测定方法，其特征在于包括如下步骤：

（1）取魔芋幼嫩叶片0.5g，玉米白化幼嫩叶片0.2g作为内参；

（2）将魔芋、玉米的幼嫩叶片混合剪碎后加到1.5mL细胞核提取液中，用刀片垂直切碎后再用400目的尼龙网过滤除去悬浮物；

（3）过滤后的细胞悬液于3000rpm下离心1.5分钟，弃上清液；

（4）离心后的沉淀于445μLMgSO₄缓冲液重悬；

（5）往细胞重悬液中加入50μL50μg/mL的RNAse和5μL50μg/mL的PI染料，混合均匀，避光下染色15分钟；

（6）染色后的细胞悬液于流式细胞仪下测定；采用488nm的蓝光激发，收集通道的荧光，检测PI的发射荧光强度；每个待测样本至少收集1万个细胞，每个样本重复测定3次以上；魔芋基因组含量值由下列公式得出：魔芋基因组含量值=内参基因组含量值*魔芋流式荧光强度/内参流式荧光强度。