[发明专利]登革热Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型RT-PCR一步MIX检测试剂盒及其检测方法有效
| 申请号： | 201510960677.4 | 申请日： | 2015-12-21 |
| 公开（公告）号： | CN105441588B | 公开（公告）日： | 2019-01-15 |
| 发明（设计）人： | 吴成贡;田仁鹏;王茵茵;邓春兴 | 申请（专利权）人： | 深圳生科原生物股份有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/686 |
| 代理公司： | 深圳中一专利商标事务所 44237 | 代理人： | 张全文 |
| 地址： | 518000 广东省深圳市宝安*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 登革热 rt pcr 一步 mix 检测 试剂盒 及其 方法 | ||
1.一种登革热Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型RT-PCR一步MIX检测试剂盒，其特征在于，包括RT-PCR反应液，所述RT-PCR反应液包括登革热Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型引物和基因探针；
所述登革热Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型引物包括：
登革热Ⅰ型上游引物：5’-GTCTGAGGGAATCTT-3’；
登革热Ⅰ型下游引物：5’-CAGCCTTTCGACGCC-3’；
登革热Ⅱ型上游引物：5’-GTYACAAGGAGTGGA-3’；
登革热Ⅱ型下游引物：5’-GAGGTCCATGATGGT-3’；
登革热Ⅲ型上游引物：5’-GTGCACACAGGAGATC-3’；
登革热Ⅲ型下游引物：5’-GATGCCTGAGGTGTTAT-3’；
登革热Ⅳ型上游引物：5’-GCTATTGAAGTCAGG-3’；
登革热Ⅳ型下游引物：5’-TAGTCCAATATGCCAC-3’；
所述基因探针包括：
登革热Ⅰ型基因探针：5’-CAAATTTAGCCGAGAGAGTTCTCG-3’；
登革热Ⅱ型基因探针：5’-TGTCATCTTCGATCTCTGGATTGT-3’；
登革热Ⅲ型基因探针：5’-CTCCCTGCGTTTCATTTCCCACC-3’；
登革热Ⅳ型基因探针：5’-CGCCTCCCATTATTGGCGG-3’。
2.如权利要求1所述的登革热Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型RT-PCR一步MIX检测试剂盒，其特征在于，所述基因探针为采用不同荧光标记物进行编码标记的基因探针，包括：
登革热Ⅰ型基因探针：
5’-FAM-CAAATTTAGCCGAGAGAGTTCTCG-BHQ1-3’；
登革热Ⅱ型基因探针：
5’-HEX-TGTCATCTTCGATCTCTGGATTGT-BHQ1-3’；
登革热Ⅲ型基因探针：
5’-ROX-CTCCCTGCGTTTCATTTCCCACC-BHQ1-3’；
登革热Ⅳ型基因探针：5’-CY5-CGCCTCCCATTATTGGCGG-BHQ3-3’。
3.如权利要求1所述的登革热Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型RT-PCR一步MIX检测试剂盒，其特征在于，所述RT-PCR反应液还包括M-MLV逆转录酶、Taq酶、dNTPs、不含镁离子的缓冲液、氯化镁、溴酚蓝。
4.如权利要求3所述的登革热Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型RT-PCR一步MIX检测试剂盒，其特征在于，所述溴酚蓝、M-MLV逆转录酶、Taq酶与所述不含镁离子的缓冲液、氯化镁、dNTPs、登革热Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型引物和基因探针采用石蜡隔离。
5.如权利要求4所述的登革热Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型RT-PCR一步MIX检测试剂盒，其特征在于，所述石蜡的熔化温度为42-50℃。
6.如权利要求1-5任一所述的登革热Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型RT-PCR一步MIX检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括阳性对照，所述阳性对照包括登革热Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型的基因组。
7.如权利要求1-5任一所述的登革热Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型RT-PCR一步MIX检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括阴性对照，所述阴性对照为不含有登革热Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型的基因组的Tris-EDTA缓冲液。
8.如权利要求1-5任一所述的登革热Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型RT-PCR一步MIX检测试剂盒，其特征在于，所述RT-PCR反应液的组成如下所述：
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