[发明专利]IL28B基因位点多态性多通道荧光PCR检测试剂盒

权利要求书

1.一种IL28B基因位点多态性检测的引物和荧光探针，其特征是：所述引物包括用于扩增rs12979860的引物1，其序列如列表中SEQID:1和SEQID:2所示；用于扩增rs8099917的引物2，其序列如列表中SEQID:3和SEQID:4所示；所述探针包括用于特异性检测rs12979860的C/T基因型的探针1C和1T，其序列如列表中SEQID:5和SEQID:6所示；所述探针包括用于特异性检测rs8099917的T/G基因型的探针2T和2G，其序列如列表中SEQID:7和SEQID:8所示；所述探针还分别连接有荧光发光基团和荧光淬灭基团，其中，探针1C、探针1T、探针2T、探针2G的荧光发光基团分别为FAM、VIC、ROX、TAMRA；各探针的荧光淬灭基团均为Eclipse。

2.权利要求1所述的引物和荧光探针在检测IL28rs12979860和IL28rs8099917基因型的应用。

3.权利要求1所述的引物和荧光探针在制备检测IL28B基因位点多态性多通道荧光PCR检测试剂盒的应用。

4.一种IL28B基因位点多态性多通道荧光PCR检测试剂盒，其特征是：其包含权利要求1所述的引物和荧光探针。

5.如权利要求4所述的试剂盒，其特征是：该试剂盒还包含阴性质控和阳性质控，阴性质控为连入T载体的rs12979860的C/C基因型和rs8099917的T/T基因型的部分序列，其序列如序列表中SEQID:9所示；阳性质控为连入T载体的rs12979860的T/T基因型和rs8099917的G/G基因型的部分序列，其序列如序列表中SEQID:10所示。

6.一种IL28B基因位点多态性多通道荧光PCR检测试剂盒，其特征是，该试剂盒具体是由DNA提取液、PCR反应液、阴性质控和阳性质控组成；其中，PCR反应液包括：10×PCR缓冲液5.0μl、MgCl₂2.0～5.0mM、dNTPs0.5～1.5mM、引物0.2～2.0μM、探针0.1～1.0μM、Taq酶2.0～4.0U、UNG酶0.5～1.0U，加水至25μl；所述引物为权利要求1所述的引物1和引物2，所述探针为权利要求1所述的探针1C和1T、探针2T和2G。

7.权利要求4～6中任一项所述的试剂盒在检测IL28rs12979860和IL28rs8099917基因型的应用。

8.采用权利要求4～6中任一项所述的IL28B基因位点多态性多通道荧光PCR检测试剂盒进行检测的方法，其特征是，包括以下步骤：

分装PCR反应液于PCR反应管内；分别加入待测DNA模板、阴性对照和阳性对照，混匀后置于荧光定量PCR仪上进行PCR扩增反应，每个循环在设定温度下采集荧光；根据扩增曲线的信号情况判读基因型。

9.如权利要求8所述的方法，其特征是：反应程序为50℃2min；94℃3min；94℃25s，61℃40s，40个循环，每个循环在61℃采集荧光。

10.如权利要求8所述的方法，其特征是，判读基因型的方法为：首先阴性质控只有FAM、ROX扩增曲线，阳性质控只有VIC、TAMRA扩增曲线，则检测结果符合预期结果，对样本进行分析；

每个样本至少会有两条曲线生成，首先分析代表rs12979860位点的FAM、VIC曲线：若只有FAM曲线，表明样本为C/C型；若只有VIC曲线，表明样本为T/T型；若同时有FAM和VIC曲线，表明样本为C/T型；

然后分析代表rs8099917位点的ROX、TAMRA曲线：若只有ROX曲线，表明样本为T/T型；若只有TAMRA曲线，表明样本为G/G型；若同时有ROX和TAMRA曲线，表明样本为T/G型。