[发明专利]一种聚乙二醇修饰的血管生成抑制剂HS-1及其应用

说明书

技术领域

本发明属于药物技术领域，尤其是涉及一种具有整合素亲和性和结合能力、具有肿 瘤靶向性的聚乙二醇修饰的血管生成抑制剂HS-1及其应用。

背景技术

研究表明，新生血管的生成对肿瘤的生长有着重要的影响，新生血管可以为实体瘤 提供其生长所需的氧气、营养以及帮助其排泄代谢产物，同时还为其能够远处转移提供 途径。所以，阻断新生血管生成可以有效的阻止肿瘤的生长及转移。所以研制出能够抗 血管生成分子的药物得到了广泛的共识。

与传统抗肿瘤药物相比，肿瘤血管生成抑制剂有着诸多优点，比如其可以靶向选择 性的作用于血管内皮细胞，对于机体的毒副作用小。再者靶点细胞为血管的内皮细胞， 药物能够轻易的与血液中与之接触发生作用。肿瘤的血管内皮细胞很少发生突变，所以 对药物不易产生耐药，可以长期用药。同时该方法可以与化疗方法联合应用并减轻其带 来的副反应程度。

目前，国际上开发出的整合素阻断剂已经入II期临床，而我国还尚未有相似或同类 产品进入市场，所以对于开发我国自主知识产权的此类药物非常有必要。整合素受体 (Integrin)为细胞黏附分子家族的重要成员之一，主要介导细胞与细胞、细胞与细胞 外基质(ECM)之间的相互作用，并介导细胞与ECM之间的双向信号传导。整合素受体是 由α和β亚基以非共价键结合而形成的跨膜异二聚体糖蛋白，属于I型膜蛋白，迄今已 发现由18种不同的α亚基和8种β亚基组成的24种整合素。内皮抑素是能够抑制内皮 细胞增殖的一类血管生成抑制剂。内皮抑素是胶原XVIII的C-端片段，分子量为20kDa，能 够特异性抑制内皮细胞的增殖和迁移，减少胶质细胞瘤血管和血流，有效抑制小鼠各种 原发肿瘤。内皮抑素能够与整合素α5β1相互作用，预示着α5β1可能是endostatin 的功能靶点。

发明内容

本发明的目的是提供一种聚乙二醇修饰的血管生成抑制剂HS-1及其应用，聚乙二醇 修饰后的HS-1可在不影响其体内外活性的同时，有效延长HS-1的半衰期，是一种新型 分子，与修饰前的分子相比，活性产生不同的效果。经过修饰后，药物的给药频率降低， 药物对肿瘤生长抑制的作用时间延长，拓展了社会价值和经济价值。

本发明的技术方案是：

一种聚乙二醇修饰的血管生成抑制剂HS-1。

优选的，所述聚乙二醇的分子量为20000，氨基酸序列如SEQID：NO.1所示，为 mPEG-SC20k-Ser-Ile-Val-Arg-Arg-Ala-Asp-Arg-Ala-Ala-Val-Pro-Gly-Gly-Gly-Gly-G ly-Arg-Asp。

本发明的另一方面，一种聚乙二醇修饰的HS-1的制备方法，包括以下步骤：

1)、合成HS-1：a、称取Fmoc-Ser-Wangresin倒入玻璃砂芯反应柱中，加入二氯 甲烷使树脂膨胀；b、加入六氢吡啶/DMF脱帽；c、洗涤：将脱帽液抽干，用DMF洗涤树 脂，抽干，取树脂放置到小试管内，加入验色剂，加热；d、缩合：称取保护氨基酸和HOBt， 溶于DMF和DIC，倒入反应釜中反应；e、洗涤：将反应液抽干，用DMF洗涤树脂，抽干， 取树脂置于小试管内，加入验色剂，加热；f、切肽：把抽干的树脂装入圆底烧瓶中，加 入切割液，密封反应，将树脂与多肽分离；g、后处理：先加无水乙醚到切割液中将多肽 析出，离心，把清液倒掉，然后再用无水乙醚洗涤多肽，抽干得多肽粗品；

2)、纯化HS-1：a、溶解：称取ID-18粗品，加入纯化水配置成溶液，超声搅拌至 无颗粒状澄清溶液；b、过滤：将ID-18的溶液用沙芯过滤器过滤；c、制备：一次纯化； d、平衡：冲洗制备柱；上样：用输液泵上样，并采集基线，检测是否有样品冲出；

3)、聚乙二醇修饰多肽：按照摩尔比为1.5∶1，分别称取PEG和HS-1，置于配好 的pH5-8.5的PBS缓冲溶液中，过夜反应；

4)、分离纯化：a、分离：对反应后的样品应用半制备型高效液相进行纯化在目的 峰出峰过程中，用离心管收集产物；b、纯化：将经过HPLC收集的产物首先于-70℃低温 冰箱预冻过夜，之后于提前遇冷的冷冻干燥机冻干，直到目测全为白色粉末为止，收获 冻干产物。

本发明的另一方面，聚乙二醇修饰的血管生成抑制剂HS-1在实体肿瘤治疗中的应用。

优选的，聚乙二醇修饰的血管生成抑制剂HS-1可用于乳腺癌和宫颈癌的治疗。